เนื่องจากเอนไซม์ ~bNS3~b เซรีนโปรตีเอสของไวรัส dengue มีบทบาทสำคัญในการตัด โปรตีนตั้งต้นของไวรัสที่ตำแหน่งจำเพาะในการย่อยโปรตีนตั้งต้น ซึ่งมีความสำคัญใน กระบวนการเพิ่มจำนวนของไวรัส การศึกษาการทำงานของเอนไซม์ ~bNS3~b เซรีนโปรตีเอสและ การออกแบบสารยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ดังกล่าวจึงเป็นความต้องการเร่งด่วนเพื่อความ ก้าวหน้าของงานวิจัยด้านนี้ในอนาคต วัตถุประสงค์ของวิทยานิพนธ์ฉบับนี้คือการผลิตโปรตีน สับสเทรต (cleavage site probe) หรือโปรตีน ~bCSP~b ที่มีส่วนประกอบของโปรตีน ~bNS2A-2B~b และ ~bNS2B-3~b เพื่อประโยชน์ในการนำไปใช้เป็นตัวติดตามการศึกษาการ ทำงานของเอนไซม์ ~bNS3~b เซรีนโปรตีเอส ยีนของโปรตีน ~bNS2A-2B~b และ ~bNS2B-3~b site ถูกเพิ่มจำนวนด้วยวิธี ~bPCR~b โดยใช้ ~bcDNA~b ของไวรัส dengue ซีโรไทพ์ 2 สายพันธุ์ 16681 เป็นแม่แบบ จากนั้นนำผลผลิต ~bPCR~b ที่ได้โคลนเข้าสู่พลาสมิด ~bpUC18~b เพื่อวิเคราะห์ลำดับเบส เมื่อพบว่ามีลำดับเบสที่เหมือนกับลำดับเบสอ้างอิงจึงโคลนเข้าสู่พลาสมิด ~bpTrcHisB~b ได้พลาสมิดลูกผสม ~bpTH-CSP~b การผลิตโปรตีนสับสเทรต ~bCSP~b กระทำโดยการเหนี่ยว นำให้ ~iE.coli~i ผลิตโปรตีนในรูปของผลึกโปรตีนซึ่งประกอบด้วยโปรตีนขนาด 28 กิโลดาลตัน ที่เชื่อมกับหมู่โพลีฮีสทีดีนทางปลายอะมิโนและโปรตีนดังกล่าวสามารถตรวจสอบได้โดยใช้ ~bNi-NTA~b conjugated alkaline phosphatase ด้วยวิธี western blot จากนั้น โปรตีน ~bCSP~b ถูกนำมาให้บริสุทธิ์โดยวิธี immobilized metal affinity chromatography และพับตัวใหม่ในคอลัมน์ ซึ่งได้ผลผลิต 1 มิลลิกรัมต่อลิตรของ ~iE.coli~i ที่มีความบริสุทธิ์มากกว่า 80 % โดยการตรวจปริมาณโปรตีนโดยวิธี Bradford อย่างไรก็ตาม โปรตีนนี้ไม่สามารถถูกตัดแยกหมู่โพลีฮีสทีดีนออกด้วยเอนไซม์เอนเทอโรไคเนสภายใต้สภาวะ การทดลองที่ใช้ได้ เมื่อโปรตีน ~bCSP~b ถูกนำมาติดฉลากด้วยสารเรืองแสงฟลูออเรสเซนต์ และทดสอบกับเอนไซม์โปรตีเอสของไวรัสที่สกัดมาจากส่วน lysate ของเซลล์เพาะเลี้ยงชนิด ~bLCC-MK(,2)~b ที่ติดเชื้อไวรัส dengue ให้ผลสอบเบื้องต้นว่าวิธีการติดด้วยสารเรืองแสง ฟลูออเรสเซนต์ที่โปรตีน ~bCSP (CSP-F)~b นี้สามารถใช้เป็นตัวติดตามเพื่อการศึกษาการ ทำงานของเอนไซม์ ~bNS3~b เซรีนโปรตีเอสได้ ซึ่งวิธีการนี้อาจนำมาปรับปรับเพื่อใช้ในการ ศึกษาโปรตีนชนิดอื่นได้