| ชื่อเรื่อง | : | การแสดงออกและการแยกบริสุทธิ์ของเอนไซม์เชิงซ้อน NS2BNS3 จากไวรัส dengue ซีโรไทพ์ 2 |
| นักวิจัย | : | ระบือศักย์ ขุมทอง |
| คำค้น | : | DENGUE VIRUS SEROTYPE 2 , NS2B-NS3 PROTEIN , POLYHISTIDINE AFFINITY TAG |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2542 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=43892 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ไวรัส dengue เป็นสาเหตุสำคัญของการเกิดโรค dengue hemorhagic fever (DHF) และ dengue shock syndrome (DSS) โดยที่สารพันธุกรรม RNA สายบวกของไวรัสนี้ควบคุม การแปลรหัส ของโปรตีนตั้งต้นขนาด 3,391 กรดอะมิโน ซึ่งจะถูกย่อยต่อไปโดยเอนไซม์ โปรตีเอส ของเจ้าบ้านและเอนไซม์ NS2B-NS3 ซึ่งเป็นโปรตีนเอสเชิงซ้อนของไวรัส ในการศึกษานี้สารพันธุกรรมสำหรับสร้างโปรตีนเชิงซ้อน NS2B-NS3 ของไวรัส dengue ซีโรไทพ์ 2 สายพันธุ์ 16681 ซึ่งถูกโคลนเข้าสู่ pTrcHisA โดยโปรตึนที่ได้จะถูกเชื่อม ต่อได้เป็นพลาสมิดลูกผสม pTHNS2B3 และถูกนำเข้าสู่แบคธีเรีย ~iEscherichia coli~i สายพันธุ์ต่าง ๆ เพื่อผลิตโปรตีน โดยโปรตีนที่ได้เชื่อมต่อกับ PolyHis Tag ทาง ด้านปลาย อะมิโน ซึ่งพบว่าโปรตีนดังกล่าวมีขนาด 88 kDa และถูกผลิตขึ้นในรูปผลึกเมื่อเหนี่ยวนำ ให้แสดงออกด้วย IPTG และสามารถตรวจสอบได้โดย Ni-NTA conjugated alkaline phosphatase ด้วยวิธี western blot นอกจากนี้พบว่าปริมาณโปรตีนที่ผลิตได้ใน ~iE.coli~i สายพันธุ์ที่ไม่สามารถสร้างโปรตีนเอส ~iopmT~i ได้แก่ BL21 และ C41(DE3) มีปริมาณสูงกว่า ในสายพันธุ์ JM109 และเมื่อโปรตีนที่ได้ถูกทำให้บริสุทธิ์เบื้องต้นโดยวิธี immobilized metal affinity chromatography และพับตัวใหม่ในคอลัมน์ ซึ่งได้โปรตีน NS2B-NS3 ที่มี ความบริสุทธิ์ถึง 75% โดยถูกผลิตได้ 1 มิลลิกรัมต่อลิตรของ ~iE.coli~i แต่ส่วน PolyHis tag ไม่สามารถถูกตัดออกได้ด้วยเอนไซม์เอนเทอโรไคเนสในสภาวะที่ใช้ และ ไม่พบการตัดสายโปรตีนภายในโมเลกุลของโปรตีน NS2B-NS3 ทั้งที่ตำแหน่งเชื่อมต่อระหว่าง โปรตีนทั้งสอง และภายในส่วน helicase domain |
| บรรณานุกรม | : |
ระบือศักย์ ขุมทอง . (2542). การแสดงออกและการแยกบริสุทธิ์ของเอนไซม์เชิงซ้อน NS2BNS3 จากไวรัส dengue ซีโรไทพ์ 2.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. ระบือศักย์ ขุมทอง . 2542. "การแสดงออกและการแยกบริสุทธิ์ของเอนไซม์เชิงซ้อน NS2BNS3 จากไวรัส dengue ซีโรไทพ์ 2".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. ระบือศักย์ ขุมทอง . "การแสดงออกและการแยกบริสุทธิ์ของเอนไซม์เชิงซ้อน NS2BNS3 จากไวรัส dengue ซีโรไทพ์ 2."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2542. Print. ระบือศักย์ ขุมทอง . การแสดงออกและการแยกบริสุทธิ์ของเอนไซม์เชิงซ้อน NS2BNS3 จากไวรัส dengue ซีโรไทพ์ 2. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2542.
|
