วัตถุประสงค์หลักของงานวิจัยนี้เพื่อหาภาวะที่เหมาะสมสำหรับการสกัดเอนไซม์แอลคาไลน์โพรทีเอสจากน้ำหมักของเชื้อแบคทีเรีย ~iBacillus subtilis~i TISTR 25 โดยใช้ระบบสารละลายน้ำสองวัฏภาคในหอสกัดโอลชูรัชตันขนาด 5.7 ลิตร โดยวัฏภาคต่อเนื่องมีองค์ประกอบของไดโพแทสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟต 19.65%(w/w) โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต8.35%(w/w) และ น้ำกรอง 72% (w/w) วัฏภาคกระจายตัวมีองค์ประกอบของ พอลีเอทิลีนไกลคอล1000 42.5%(w/w) ไดโพแทสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟต 1.75%(w/w) โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต0.75%(w/w) และน้ำกรอง 55%(w/w) ซึ่งการทดลองจะประกอบด้วยการศึกษาปัจจัยที่มีผลต่อการสกัดเอนไซม์แอลคาไลน์โพรทีเอสจากแบคทีเรีย ~iBacillus subtilis~i TISTR 25 โดยจะทำการหาอิทธิพลของความเข้มข้นของน้ำหมักในวัฏภาคต่อเนื่อง (20 40 และ 55%(w/w) อิทธิพลของอัตราการไหลเชิงปริมาตรของวัฏภาคต่อเนื่อง/วัฏภาคกระจายตัว โดยกำหนดให้สัดส่วนเชิงปริมาตรของวัฏภาคต่อเนื่อง/วัฏภาคกระจายตัวคงที่ที่ 3:1 (42/12, 69/28 และ 97/28 มิลลิลิตรต่อนาที)และอิทธิพลของการปั่นกวนของใบพัด (100 และ 140 รอบนาที) โดยพิจารณาจากประสิทธิภาพการสกัดได้แก่ จำนวนเท่าของความบริสุทธิ์ เปอร์เซ็นต์ผลได้ ค่าสัมประสิทธิ์การถ่ายเทมวลรวมของเอนไซม์แอลคาไลน์โพรทีเอสระหว่างวัฏภาค และโพรไฟล์ความเข้มข้นของเอนไซม์ในวัฏภาคต่อเนื่องตามความสูงของหอสกัด รวมถึงจะทำการทดสอบเสถียรภาพของเอนไซม์ที่สามารถสกัดได้ จากการวิจัยพบว่า ภาวะที่เหมาะสมสำหรับการสกัดเอนไซม์แอลคาไลน์โพรตีเอสจากน้ำหมักของเชื้อแบคทีเรีย ~iBacillus subtilis~i TISTR 25 โดยใช้ระบบสารละลายน้ำสองวัฏภาคในหอสกัดโอลชูรัชตันขนาด 5.7 ลิตร คือ ที่ค่าความเข้มข้นของน้ำหมักเริ่มต้นในวัฏภาคต่อเนื่องเท่ากับ 55 เปอร์เซ็นต์โดยน้ำหนัก ที่อัตราการไหลเชิงปริมาตรของวัฏภาคต่อเนื่อง/วัฏภาคกระตัวที่ 97/28 มิลลิลิตรต่อนาที และที่การปั่นกวนของใบพัดที่อยู่ในช่วง 100-140 รอบต่อนาที โดยจะให้จำนวนเท่าของความบริสุทธิ์ เปอร์เซ็นต์ผลได้ และค่าสัมประสิทธิ์การถ่ายเทมวลรวมของเอนไซม์แอลคาไลน์โพรทีเอสระหว่างวัฏภาคเท่ากับ 1.39-1.43 เท่า52.14 - 51.78 เปอร์เซ็นต์ และ 4.49-4.52 X 10('-4) นาที('-1) ตามลำดับ ซึ่งที่อัตราการไหลเชิงปริมาตรนี้สามารถสกัดน้ำหมักได้ 76.82 ลิตรในระยะเวลาสกัด 1 วัน ส่วนการทดสอบเสถียรภาพของเอนไซม์แอลคาไลน์โพรทีเอสที่ผ่านการสกัดแล้วซึ่งกระจายตัวอยู่ในวัฏภาคกระจายตัวที่อุณหภูมิห้อง ระยะเวลาเก็บ 3 สัปดาห์ พบว่าเอนไซม์มีค่ากิจกรรมเอนไซม์ลดลงจากเริ่มต้นเป็น 14.3 เปอร์เซ็นต์