งานวิจัยนี้เป็นการผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสจาก ~iA. oryzae~i U1521 โดยกระบวนการ 2 ขั้นตอน ขั้นตอนแรกเป็นการเลี้ยงเซลล์ให้มีปริมาณมาก และขั้นตอนทีสองเป็นการเหนี่ยวนำให้เซลล์ผลิตและขับอัลคาไลน์โปรติเอสออกมา ในการทดลองผลิตเซลล์ใช้แหล่งคาร์บอน 3 ชนิด คือ กลูโคส อะราบิโนสและแลคโตส ส่วนแหล่งของไนโตรเจน คือ ฮีสทิดีน แอมโมเนียมคลอไรด์และกรดกลูตามิค จากการเปรียบเทียบแหล่งคาร์บอนพบว่าแลคโตสถูกใช้ได้ช้าที่สุดและให้เซลล์ ต่ำกว่ากลูโคสและอะราบิโนส ที่ความเข้มข้นแลคโตส 5 กรัมต่อลิตร และฮีสทิดีน 5 มิลลิโมลาร์ และแอมโมเนียมคลอไรด์ 5 กรัมต่อลิตร เป็นแหล่งไนโตรเจน สามารถผลิตเซลล์ความเข้มข้น 1.6 และ 1.3 กรัมต่อลิตร เมื่อใช้กลูโคสสามารถผลิตเซลล์ความเข้มข้น 2.04 และ 1.9 กรัมต่อลิตร และ อะราบิโนสสามารถผลิตเซลล์ความเข้มข้น 2.01 และ 1.9 กรัมต่อลิตร ตามลำดับ จากการเปรียบเทียบแหล่งของไนโตรเจนเมื่อมีกลูโคสเป็นแหล่งคาร์บอน พบว่าเมื่อใช้กรดกลูตามิค 5 กรัมต่อลิตร เป็นแหล่งไนโตรเจน ได้ปริมาณเซลล์ 2.98 กรัมต่อลิตร และเมื่อใช้ฮีสทิดีนและแอมโมเนียมคลอไรด์ให้เซลล์ 2.04 และ 1.88 กรัมต่อลิตร เมื่อมีกรดกลูตามิคหรือแอมโมเนียมคลอไรด์เป็นแหล่งไนโตรเจน ~iA. oryzae~i U1521 ใช้กลูโคสได้หมดภายใน 48 ชั่วโมง ในขณะที่มีฮีสทิดีน ใช้เวลามากกว่า 72 ชั่วโมงจากการใช้กลูโคส 2.5 กรัมต่อลิตร และกรดกลูตามิค 2.5 กรัมต่อลิตร เป็นอาหารเริ่มต้น และเติมแหล่งอาหารทั้งสองเพิ่มในระหว่าง การเลี้ยง พบว่าการเติมกลูโคสและกรดกลูตามิคอย่างละ 2.5 กรัมต่อลิตร เพิ่มในชั่วโมงที่ 36 พบว่าให้เซลล์เพิ่มขึ้นจาก 1.4 กรัมต่อลิตร เป็น 2.54 และ 3.05 กรัมต่อลิตร ในชั่วโมงที่ 48 และ 72 ตามลำดับ ในขณะที่ใช้กลูโคส และกรดกลูตามิคเริ่มต้นเท่ากันแต่เติมเฉพาะกลูโคส 0.5 กรัมต่อลิตร ที่ชั่วโมง ที่ 24 และ 38 พบว่าให้เซลล์ 2.12 และ 2.39 กรัมต่อลิตร ที่ชั่วโมงที่ 48 และ 72 เซลล์อายุ 24 48 และ 72 ชั่วโมง ที่เลี้ยงในกลูโคสและกรดกลูตามิค เมื่อย้ายไปยัง minimal medium ผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสได้ 257,933 328,933 และ 65,667 ยูนิตต่อกรัมเซลล์ ตามลำดับ ในขณะที่เซลล์ที่เลี้ยงในกลูโคส และฮีสทิดีน ที่ย้ายไปใน minimal medium ผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสได้ 300,800 และ 142,067 ยูนิตต่อกรัมเซลล์ ที่ชั่วโมงที่ 48 และ 72 ชั่วโมง ตามลำดับ โดยเซลล์อายุ 24 ชั่วโมง ผลิตเอ็นไซม์ได้ต่ำ เมื่อย้ายเซลล์ที่เลี้ยงแบบกะ ในอาหารที่มีกลูโคสและกรดกลูตามิคไปเลี้ยงต่อใน minimal medium และที่มีการเติม 0.1% (w/v) yeast extract ผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสได้ 323,267 และ 1,240,000 ยูนิตต่อกรัมเซลล์ ตามลำดับ yeast extract และเปปโตนที่เติมลงไปใน minimal medium เหนี่ยวนำให้ ~iA. oryzae~i U1521 สร้างอัลคาไลน์โปรติเอสได้เพิ่มขึ้น โดยเซลล์ที่เลี้ยง ในกลูโคสและฮีสทิดีนเมื่อย้ายไปในอาหารที่เติม 0.1% (w/v) yeast extract และ 0.1%(w/v) เปปโตน ผลิตเอ็นไซม์ได้เพิ่มขึ้นจาก 24,260 เป็น 327,600 และ 536,370 ยูนิตต่อกรัมเซลล์ ตามลำดับ