Burkholderia pseudomallei, Burkholderia mallei and Burkholderia thailandensis แบคทีเรียทั้ง 3 นี้จัดอยู่ใน Genus เดียวกัน ที่มีคุณสมบัติที่น่าสนใจบางประการคล้ายคลึงกัน แบคทีเรีย B. pseudomallei เป็นเชื้อที่ก่อโรคเมดิออยโดสิสในคนและสัตว์บ้าง ส่วน B. mallei เป็น สาเหตุของโรคมองคล่อพิษในสัตว์และพบบ้างในคน สำหรับ B. thailandensis เป็นชนิดที่ไม่ก่อโรค ซึ่งมีคุณสมบัติที่เป็น Ara+ ในขณะที่ B. pseudomallei มีคุณสมบัติที่เป็น Ara- ซึ่งเป็นเชื้อที่ก่อโรค มีความรุนแรงของการก่อโรค ซึ่งน่าจะมียีนและผลผลิตของยีนที่แตกต่างจาก B. thailandensis โครงการวิจัยนี้จึงศึกษาโดยดูผลผลิตโปรตีนของแบคทีเรียทั้ง 2 ที่ระยะการเจริญเติบโตต่างกัน (5 ชั่ว โมง และ 12 ชั่วโมง) ผ่านการวิเคราะห์ด้วย SDS-Gel และ 2-D gel electrophoresis เพื่อเป็นแนว ทางในการตั้งสมมุติฐานของความแตกต่างที่พบ จากนั้นจึงใช้เทคนิค Differential Display RT-PCR เพื่อแยกยีนที่แตกต่างที่พบใน B. pseudomallei แต่ไม่พบใน B. thailandensis จากการวิจัยนี้ สามารถแยกยีนที่พบใน B. pseudomallei ซึ่งยีนดังกล่าวเมื่อหาลำดับเบสพบเป็นยีนที่มีลักษณะเป็น ยีนที่แปลรหัสเป็นโปรตีน โดยมีรหัสเหมือนกับยีน Transposase (Tn10) ที่พบในเชื้อ Salmonella typhi จากการเปรียบเทียบจำนวนซ้ำและการกระจายตัวของยีนนี้ในกลุ่มแบคทีเรียทั้ง 3 ชนิด โดยวิธี Southern blot hybridization พบว่ายีนดังกล่าวมีจำนวนซ้ำและการกระจายตัวในยีโนมที่มีแบบแผน ต่างกัน และที่มีนัยสำคัญคือสามารถตรวจวัดยีนนี้ได้ในเชื้อที่ก่อโรค ส่วนเชื้อที่ไม่ก่อโรคจะไม่สามารถ ตรวจสอบได้ แสดงว่ายีนดังกล่าวน่าจะมีความเกี่ยวพันธ์กับการก่อโรคของแบคทีเรียในกลุ่มนี้ นอก จากนี้ยังได้อาศัยข้อมูลเกี่ยวกับยีโนมของ B. pseudomallei เพื่อสืบหายีนที่น่าจะมีบทบาทในการก่อ โรคของแบคทีเรียนี้ โดยได้นำเอาข้อมูลของยีน sigma S ซึ่งเป็นยีนที่ควบคุมการแสดงออกของกลุ่ม ยีนที่เกี่ยวกับการอยู่ในสภาวะที่ตึงเครียส และทำการศึกษาการทำงานของยีนดังกล่าวนี้ว่ามีส่วนเกี่ยว ข้องกับกลุ่มยีนใดบ้าง โดยใช้วิธีการ knock out ยีนในแบคทีเรีย B. pseudomallei เพื่อให้เกิดสาย พันธ์ที่เป็น mutant และเปรียบเทียบคุณสมบัติการทนอยู่ของสภาวะต่างๆเพื่อเข้าใจกลไกการเกี่ยว ข้องกับกลุ่มยีน จากผลการศึกษาพบว่า sigma S น่าจะมีความสำคัญต่อแบคทีเรีย ในสภาวะที่ สามารถทนทานต่อกรดอย่างมีนัยสำคัญ ดังนั้นยีน sigma S ซึ่งเป็นยีนควบคุมยีนหนึ่งที่น่าจะมีบท บาทสำคัญต่อการควบคุมกลุ่มยีนที่ก่อความรุนแรงในเชื้อนี้ Burkholderia pseudomallei, Burkholderia mallei and Burkholderia thailandensis are in the same genus and share some interesting properties. The former species is the zoonostic agent of glander, while the second is an etiologic agent of melioidosis. Due to B. pseudomallei (Ara-) has more virulent than B. thailandensis (Ara+), thus the studying of differential gene expressed in virulence factors has been performed. The studying of whole cells protein patterns in SDS-PAGE and 2-D gel electrophoresis revealed the differentially expressed of some proteins between the different growth stages and between these two different species at the same growth stage (5th and 12th hr). The information of protein patterns used to be a preliminary data in the studying of gene expression, which performed by the new technique, Differential display RT-PCR (DDRT-PCR). In this report, the entire coding sequence of a transposase-like gene was first identified in Burkholderia pseudomallei NF10/38. The gene was 100% homologous to the Tn10 transposase gene from Salmonella typhi. In order to compare the gene localization among the three species (B. mallei, B. pseudomallei and B. thailandensis), Southern blot hybridization was performed. The hybridization pattern revealed differences in gene distribution and in copy number with the virulent species showing a higher copy number than in the non-virulent species. This finding indicate an indirect relationship between a transposase and the virulent nature of the bacteria. In addition, we also study a functional sigma S gene function in Burkholderia pseudomallei. The gene sequence was picked up from genome database of B. pseudomallei and was used for gene knock out to produce a mutant B. pseudomallei. The sigma S factor is a regulator protein that involves in the regulation of the bacteria survival in acid condition. The gene therefore should be a key factor for regulation of other virulence factors of the bacteria.