เชื้อแบคทีเรียพวกสไปโรขีตที่อยู่ใน genus Leptospira ประกอบด้วย species ที่ก่อโรค คือ Leptospira interrogans (L. interrogans) และ species ที่ไม่ก่อโรค คือ Leptospira เชื้อ เลปโตสไปราที่ก่อโรคเป็นต้นเหตุของโรคเลปโตสไปโรสิส (Leptospirosis) หรือโรคฉี่หนู ซึ่งเป็น โรคที่ติดต่อจากสัตว์สู่คน (zoonosis) ที่พบได้ทั่วโลก สำหรับในประเทศไทย มีรายงานผู้ป่วย โรคเลปโตสไปโรสิสประมาณ 5,000 รายต่อปี อาการของผู้ป่วยที่ติดเชื้อเลปโตสไปรามีทั้งแบบที่ ไม่มีอาการรุนแรงเป็นคล้ายไข้หวัด จนถึงแบบที่มีอาการรุนแรงถึงขั้นเสียชีวิตได้ ในการศึกษา ครั้งนี้ได้นำเทคนิคการทำ Representational difference analysis เข้ามาใช้ในการค้นหายีนที่ จำเพาะต่อเชื้อ L. interrogans serovar autumnalis strain L453 ซึ่งเป็นเชื้อที่แยกได้จากผู้ ป่วยโรคเลปโตสไปโรสิสที่มีอาการรุนแรง โดยการทำ subtractive hybridization ระหว่าง โครโมโซมของเชื้อ L453 กับ L. biflexa serovar patoc สายพันธุ์ Patoc I ผลการศึกษาครั้งนี้ ได้สร้าง library ของ subtractive clone ที่มี insert ของ RDA product อยู่จำนวน 65 clone ใน การนี้จากการทำ Southern blot hybridization analysis พบว่า insert DNA fragments ของ 5 subtractive clone ที่เลือกนำมาทำการทดสอบเป็น DNA fragment ที่จำเพาะในสายพันธุ์ L453 และไม่พบใน L. biflexa ผลการทำ DNA sequence analysis พบว่า fragment ที่ได้มี sequence similarity กับ putative lipoprotein, the outer membrane proteins ใน Rhs family protein, methyl malonyl-CoA mutase, acyl-CoA thioesterase และ putative propionyl-CoA carboxylase ของ L. interrogans serovar copenhageni และ serovar lai สำหรับ putative lipoprotein และ outer membrane protein ใน Rhs family protein เป็นโปรตีนที่อาจจะเกี่ยว ข้องในการก่อโรค ส่วน methyl malonyl-CoA mutase, acyl-CoA thioesterase และ putative propionyl-CoA carboxylase เป็นเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องใน lipid metabolism สรุปได้ว่าเทคนิค RDA สามารถนำมาใช้ในการ identify ยีนที่จำเพาะในเชื้อเลปโตสไปราสายพันธุ์หนึ่งที่ไม่ ปรากฏอยู่ในเชื้ออีกสายพันธุ์ได้ การศึกษาขั้นต่อไปถึงบทบาทของโปรตีนเหล่านี้ อาจทำให้ได้ องค์ความรู้ใหม่ที่จะช่วยเพิ่มความรู้ ความเข้าใจในเรื่องของกลไกการทำให้เกิดโรคเลปโตสไปโร สิสอันจะเป็นประโยชน์ต่อการป้องกัน หรือรักษาโรคได้ในอนาคต Spirochetes in the genus Leptospira are divided into two species, the pathogenic Leptospira interrogans (L. interrogans) and the free-living nonpathogenic L. biflexa. Pathogenic leptospires are the causative agent of leptospirosis, a worldwide zoonotic disease that is now regarded as one of the major emerging infectious diseases. In Thailand, there are about 5,000 cases of leptospirosis per year. Clinical manifestations of leptospirosis are varied ranging from a mild flu-like illness to a severe syndrome of multi-organ infection with a high mortality rate. In this study, the technique of representational difference analysis (RDA) has been employed to identify genomic differences between L. interrogans serovar autumnalis strain L453, isolated from a Thai patient with severe leptospirosis, and the non virulent strain, L. biflexa serovar patoc strain Patoc I. DNA sequences present only in the virulent strain, L453, were achieved through subtractive hybridization of genomic DNA of L453 with L. biflexa. A library of 65 subtractive clones containing the amplified difference products was obtained. Southern blot hybridization analyses, using the insert difference products from 5 randomly chosen clones as a probe, indicated that all inserts are unique to L453. DNA sequence analysis of those inserts showed sequence similarities to a putative lipoprotein, the outer membrane protein encoded by the rhs gene family, methyl malonyl-CoA mutase, acyl- CoA thioesterase and putative propionyl-CoA carboxylase of L. interrogans serovars copenhageni and lai. The putative lipoprotein and the outer membrane protein encoded by the rhs gene family are considered as potential virulence factors, whereas methyl malonyl-CoA mutase, acyl-CoA thioesterase and putative propionyl-CoA carboxylase are involved in lipid metabolism. Therefore, RDA proved effective for the identification of genomic regions unique to L. interrogans strain L453. Functional analysis of these gene products may provide an insight to the differences in pathogenicity in the L453 strain that causes severe disease.