Bacillus sp. FK14 ผลิตเอนไซม์เคราติเนสสูงสุด ณ ชั่วโมงที่ 72 ในอาหารที่ประกอบด้วยขนไก่ป่น ( feather meal ) 1 เปอร์เซ็นต์เป็นสับสเตรทในสภาวะการเลี้ยงดังนี้ ความเป็นกรด ด่างของอาหารเริ่มต้น 7.5 อัตราการเขย่า 150 รอบต่อนาทีและอุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเอนไซม์เคราติเนสถูกทำให้เข้มข้นด้วยวิธี Ultrafiltration โดยเมมเบรนขนาด 10 kDa และตกตะกอนเอนไซม์ด้วยเกลือแอมโมเนียซัลเฟตที่ความอิ่มตัวของเกลือ 40เปอร์เซ็นต์ เอนไซม์ถูกทำให้บริสุทธิ์ด้วยคอลัมน์ DEAE Sepharose 2 ครั้ง เอนไซม์เคราติเนสบริสุทธิ์มีค่ากิจกรรมเอนไซม์จำเพาะ 104 ยูนิตต่อมิลลิกรัม มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 41 เท่า และผลผลิต 105 เปอร์เซ็นต์ เอนไซม์บริสุทธิ์มีลักษณะเป็นโมเลกุลเดี่ยวขนาด 35 กิโลดาลตัน ความเป็นกรดด่างและอุณหภูมิที่เหมาะสมต่อกิจกรรมของเอนไซม์ คือ 8.5 และ 60 องศาเซลเซียสตามลำดับ เอนไซม์มีความคงตัวในช่วงความเป็นกรดด่าง 7.0 – 9.0 และที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เอนไซม์ถูกยับยั้งปฏิกิริยาด้วย phenylmethysulfonylfluoride ( PMSF ) ECTA และ lodoacetamide 96 , 62 และ 22 เปอร์เซ็นต์ตามลำดับ เอนไซม์นี้คาดว่าอยู่ในกลุ่ม serine protease และพบว่าอิออนของโลหะช่วยเพิ่มกิจกรรมของเอนไซม์โดยเฉพาะ Mn2+ และ Al3+ และถูกยับยั้งการทำงานด้วย Fe3+ เอนไซม์สามารถย่อยสลายโปรตีนที่ละลายน้ำได้แก่ casein , gelatin , BSA และ elastin มีค่า relative activity 100 , 79.5 , 76.5 และ 3.6 เปอร์เซ็นต์ตามลำดับและย่อยสลายโปรตีนที่ไม่ละลายน้ำได้แก่ collagen , human nail , keratin azure , chicken feather และ human hair มีค่า relative activity 35.6 , 16.35 , 9.0 , 5.1 และ 2.8 เปอร์เซ็นต์ตามลำดับ Bacillus sp. FK14 produced an extracellular keratinase in a medium containing feather meal as a substrate at pH7.5 , 37 ?C and 150 rpm. The keratinase was purified by ultrafiltraton ( YM10 ) , 40% ammonium sulfate fractionation and two columns of anion exchange chromatography ( DEAE Sepharose ). After purification, the keratinase exhibited high specific activity ( 104 U/mg ) with 41 purification fold and 105% yield. The enzyme was monomeric and had a molecular mass of 35 Kda. The enzyme had optimum pH and temperature of 8.5 and 60 ?C , respectively. The enzyme was stable over the pH range between 7 – 9 and stable up to 37 ?C. The enzyme activity was inhibited by PMSF , EDTA and lodoacetamide at 96% , 62% and 22% , respectively. It indicates that the enzyme is serine protease. It was stimulated by most metal ions except Fe 3+ and had the highest relative activity with Mn 2+ and Ai 3+. Keratinase was capable of hydrolysion the soluble proteins and insoluble proteins. It hydrolysed soluble proteins ; casein , gelatin , BSA and elastin with relative activity of 100% , 79.5% , 76.5% and 3.6% , respectively. It also hydrolysed insoluble insoluble proteins ; collagen , human nail , keratin azure , chicken feather and human hair with relative activity of 35% , 16.35% , 9.0% , 5.1% and 2.8% , respectively.