| ชื่อเรื่อง | : | กระบวนการต่อสายยาวของกรดไขมันในเมทิลโลโทรฟิกยีสต์ ~iHansenula polymorpha~i CBS 1976 และสายพันธุ์กลายชนิดที่ต้องการกรดไขมัน |
| นักวิจัย | : | วนิดา วงศ์สัมพันธ์ชัย |
| คำค้น | : | ELONGASE , FATTY ACID , ~iHansenula polymorpha~i , SATURATED FATTY ACID AUXOTROPHIC MUTANT |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2547 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1082547000917 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ได้แยกสายพันธุ์กลายชนิดที่ต้องการกรดไขมัน (V1 ถึง V10) ของ ~iHansenula polymorpha~iจากการกลายพันธุ์ของ sild-type โดยใช้สารเคมี ethyl methanesulfonate (EMS) เมื่อทำการเพาะเลี้ยงสายพันธุ์กลาย พบว่า ทุกสายพันธุ์กลายที่คัดเลือกได้ไม่สามารถเจริญได้บนอาหาร YEPD หลังจากการปั๊มด้วยเพลทต้นแบบของ YEPD ที่เสริมด้วยกรดไขมันผสมของ C14:0C16:0 และ C18:0 ที่มีความเข้มข้นอย่างละ 1 MM เพื่อที่จะจัดจำแนกกลุ่มของสายพันธุ์กลายจึงได้ทำการศึกษาการเจริญบนอาหารที่เสริมด้วย กรดไขมันชนิดต่างๆ ได้แก่ C14:0 C16:0และ C18:0 ที่ความเข้มข้น 1 mM และ/หรือ 2 mM ผลการศึกษาพบว่าสามารถจัดจำแนกสายพันธุ์กลายได้ 3 กลุ่ม ซึ่งมีการแสดงฟีโนไทป์ที่ต่างกัน โดยกลุ่มที่หนึ่งมี 6 สายพันธุ์กลาย(V1 ถึง V6) ซึ่งไม่สามารถเจริญบนอาหารแข็งที่เสริมด้วย 1 mM ของ C16:0 อย่างไรก็ตาม2 mM ของ C16:0 และ 1-2 mM ของ C18:0 สามารถช่วยเสริมการเจริญของสายพันธุ์กลายกลุ่มนี้ได้จากผลของกลุ่มแรกที่ไม่สามารถเจริญได้ใน 1 mM ของ C16:0 แสดงว่าสายพันธุ์กลายกลุ่มนี้น่าจะมีความบกพร่องบางส่วนในขั้นตอนของการต่อสายยาวของคาร์บอนจาก C16 ถึง C18 สำหรับกลุ่มที่สอง พบว่ามีเพียง 1 สายพันธุ์กลาย (V7) ซึ่งไม่สามารถเจริญได้บนอาหารที่เสริม้วย1 mM ของ C14:0 และเมื่อเลี้ยงในอาหารที่เสริมด้วยกรดไขมันผสมของ C14:0 C16:0 และ C18:0พบว่ามีการสะสมของกรดไขมัน C14:0 มากกว่า parental strain ที่เลี้ยงในอาหารสูตรเดียวกันแสดงว่าสายพันธุ์กลายกลุ่มนี้ น่าจะมีความบกพร่องที่ขั้นตอนของการต่อสายยาวของคาร์บอนจาก C14:0 ถึง C16:0 ส่วนสายพันธุ์กลายกลุ่มสุดท้าย (V8 V9 และ V10) พบว่าไม่สามารถเจริญได้ บนอาหารที่เสริมด้วย 1 mM ของ C16:0 และ 1 mM ของ C18:0 แต่สามารถเจริญได้บนอาหารที่ต้องมี C14:0 เป็นองค์ประกอบ แสดงว่าสายพันธุ์กลายกลุ่มนี้น่าจะมีความบกพร่องที่ขั้นตอนการต่อสายยาวของคาร์บอนที่มีความยาวน้อยกว่า C14 จากการผสมสายพันธุ์ระหว่างสายพันธุ์กลายทั้งสามกลุ่มกับสายพันธุ์ที่ต้องการกรดไขมัน(~iura3-1~i) และทำการคัดเลือกลูกผสมบนอาหาร minimal medium (MIN) ที่เสริมด้วยกรดไขมันผสมของ C14:0, C16:0 และ C18:0 แต่ไม่เติม uracil และบนอาหาร MIN ที่เติม uracilโดยลูกผสมที่ได้จากทั้งสามกลุ่มของสายพันธุ์กลายได้นำไปใช้เป็น recipient strain สำหรับขั้นตอนทางการทดสอบการ complementation โดยยีสต์ลูกผสมได้ถูกทรานสฟอร์มด้วย plasmidYCpELO1.MOD ที่มีลำดับการถอดรหัสของ ~iS-ELO1~i โดยมี ~iUR43~i เป็น selective markerและ plasmid YCpGALELO2(U) ที่มีลำดับการถอดรหัสของ ~iS-ElO2~i โดยมี ~iURA3~i และgalactose-inducible GAL promoter เป็น selective marker เซลล์ยีสต์ถูกทรานสฟอร์มโดยใช้ลิเทียม อะซิเตท และคัดเลือกบนอาหาร MIN ที่เสริมด้วยกรดไขมัน สำหรับประสิทธิภาพของการทรานสฟอร์มถูกวัดโดยการทำ plating aliquots ของทรานสฟอร์มเมนท์บนอาหารเลี้ยงเชื้อจากสายพันธุ์กลายทั้งสามกลุ่ม พบว่ามีเพียง ~iELO2 ทรานสฟอร์มเมนท์ กลุ่มเดียวที่สามารถเจริญได้บนอาหารที่ไม่เสริมกรดไขมัน แต่ใส่ galactose โดยประมาณ 15 จาก 150 ทรานสฟอร์มเมนท์ออกแบบเป็น VT1 (~iURA3, FAE1) ที่มี ~iELO2~i ถูกคัดเลือกแบบสุ่มเพื่อนำไปใช้ศึกษาลักษณะการเจริญของทรานสฟอร์มเมนท์ VT1 บนอาหารแข็งและอาหารเหลวที่เสริมด้วยกรดไขมันชนิดต่าง ๆเปรียบเทียบกับลักษณะการเจริญของ wild-type ผลการศึกษาในทุกสภาวะของการทดลอง พบว่าVT1 มีลักษณะของการเจริญที่พบทั้งในอาหารแข็งและอาหารเหลว คล้ายกับการเจริญของ wild-typeนอกจากนี้ จากการเปรียบเทียบโครมาโตแกรมของ fatty acid methyl esters (FAMEs) ของwild-type และ VTI ที่เจริยบนอาหาร YEPD และ YEPD ที่เสริมด้วยกรดไขมันชนิดต่าง ๆจากการเลี้ยงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง พบว่ามีปริมาณและสัดส่วนของกรดไขมันต่างๆ คล้ายคลึงกัน สำหรับผลการศึกษาที่กล่าวมาแสดงให้เห็นว่า ~iELO2~i ของ ~iS. cerevisiae~i สามารถชดเชยส่วนที่บกพร่องของสายพันธุ์กลาย VI ของ ~iH. polymorpha~i ได้ ซึ่งแสดงให้เห็นว่ามีความบกพร่องของกระบวนการผลิตกรด ไขมันในสายพันธุ์กลาย VI โดยพบว่ามีความบกพร่องบางส่วนอย่างน้อยคือในขั้นตอนของการต่อสายยาวของคาร์บอน จาก C16 ถึง C18 นอกจากนี้ข้อมูลที่ได้จากการศึกษานี้สามารถนำไปใช้ในการศึกษาสายพันธุ์กลายชนิดที่มีความบกพร่องตรง elongaseเพื่อมุ่งสู่ความรู้ความเข้าใจเกี่ยวกับวิถีเมตาโบลิซึมในยีสต์นี้ |
| บรรณานุกรม | : |
วนิดา วงศ์สัมพันธ์ชัย . (2547). กระบวนการต่อสายยาวของกรดไขมันในเมทิลโลโทรฟิกยีสต์ ~iHansenula polymorpha~i CBS 1976 และสายพันธุ์กลายชนิดที่ต้องการกรดไขมัน.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. วนิดา วงศ์สัมพันธ์ชัย . 2547. "กระบวนการต่อสายยาวของกรดไขมันในเมทิลโลโทรฟิกยีสต์ ~iHansenula polymorpha~i CBS 1976 และสายพันธุ์กลายชนิดที่ต้องการกรดไขมัน".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. วนิดา วงศ์สัมพันธ์ชัย . "กระบวนการต่อสายยาวของกรดไขมันในเมทิลโลโทรฟิกยีสต์ ~iHansenula polymorpha~i CBS 1976 และสายพันธุ์กลายชนิดที่ต้องการกรดไขมัน."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2547. Print. วนิดา วงศ์สัมพันธ์ชัย . กระบวนการต่อสายยาวของกรดไขมันในเมทิลโลโทรฟิกยีสต์ ~iHansenula polymorpha~i CBS 1976 และสายพันธุ์กลายชนิดที่ต้องการกรดไขมัน. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2547.
|
