| ชื่อเรื่อง | : | การโคลนยีนไซโคลเดกซ์ทริน กลูคาโนทรานสเฟอเรส จาก BacillusA(,11) ใน Escheichia cili |
| นักวิจัย | : | สุรศักดิ์ ศิริพรอดุลศิลป์ |
| คำค้น | : | MOLECULAR CLONING OF GENE , CYCLODEXTRIN GLUCANOTRANSFERASE |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2535 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1082535000831 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ได้ทำการโคลนยีนไซโคลนเดกซ์ทริน กลูคาโนทรานสเฟอเรส(CGTase gene) จาก Bacillus A(,11) เข้าไปใน Escherichiacoli โดยใช้พลาสมิด pBR322, pUC18 และ pSE411 เป็นดีเอ็นเอพาหะตามลำดับ นำดีเอ็นเอของโครโมโซมจาก Bacillus A(,11) ที่ย่อยด้วยเรสติกชั่นเอนไซม์ Sau3AI แบบไม่สมบูรณ์ (partial digestion)มาเชื่อมเข้ากับตำแหน่ง BamHI บนพลาสมิด pBR322 แล้วเคลื่อนย้ายรีคอมบิแนนท์พลาสมิดที่สร้างขึ้นใหม่เข้าสู่เซลล์เจ้าเรือน E. colistrain HB101 ทำการคัดเลือกทรานสฟอร์แมนท์ที่สามารถผลิตเอนไซม์ CGTaseโดยการวัดแอคติวิตีของเอนไซม์ซึ่งประกอบด้วยการทำ iodine-test, phenolred inclusion complex test (PICT), cyclodextrin trichloroethyleneassay (CD-TCE assay) และ วิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ CDs ด้วย HPLCรีคอมบิแนนท์พลาสมิดที่มี CGTase gene ให้ชื่อว่า pSV1 มีขนาดของชิ้นดีเอ็นเอจาก Bacillus A(,11) ประมาณ 20-22 kb เนื่องจาก pSV1มีขนาดใหญ่และไม่เสถียร จึงทำการโคลนยีนต่อ โดยย่อยรีคอมบิแนนท์พลาสมิดpSV1 ด้วยเรสติกชั่นเอนไซม์ Sau3AI แบบไม่สมบูรณ์ แล้วเลือกชิ้นดีเอ็นเอที่มีขนาดประมาณ 2-6 kb และเชื่อมชิ้นดีเอ็นเอนี้เข้าไปในตำแหน่ง BamHIของพลาสมิด pUC18 เคลื่อนย้ายรีคอมบิแนนท์ดีเอ็นเอเข้าสู่เซลล์เจ้าเรือนE. coli strain JM101 พบทรานสฟอร์แมนที่แสดง amylolytic activity3 ทราน-สฟอร์แมนท์ แต่แสดง CGTase activity เพียง 2 ทรานสฟอร์แมนท์และสามารถกระตุ้นการสร้างเอนไซม์ CGTase ได้ด้วย IPTG ให้ชื่อรีคอมบิแนนท์พลาสมิดใหม่นี้ว่า pSV2 และ pSV3 ซึ่งมีขนาดของชิ้นดีเอ็นเอจาก Bacillus A(,11) ประมาณ 6.8 และ 5.2 kb ตามลำดับ เนื่องจากการนำรีคอมบิแนนท์พลาสมิด pSV3 มาศึกษา restriction map ทำได้ยากจึงได้โคลนยีนต่ออีกครั้งโดยย้าย inserted DNA fragment จากรีคอมบิแนนท์พลาสมิด pSV3 ไปตัดต่อเข้ากับพลาสมิด pSE411 โดยใช้เรสติกชั่นเอนไซม์ PstI และ KpnI แล้วทรานสฟอร์มเข้า E. colistrain HB101 ให้ชื่อทรานสฟอร์มแนท์และรีคอมบิแนนท์พลาสมิดที่สร้างขึ้นใหม่ว่า SV5 และ pSV5 ตามลำดับ เมื่อศึกษา restriction map ของรีคอมบิแนนท์พลาสมิต pSV5 พบว่า CGTase gene Bacillus A(,11)แตกต่างจาก CGTase gene จากสายพันธุ์อื่น ผลการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์CDsด้วยPHLC พบว่าทรานสฟอร์แมนท์ SV5 ให้ผลิตภัณฑ์ (...)-CD ในสัดส่วนที่มากที่สุดตามด้วย (...)- และ (...)-CD สามารถตรวจพบแถบโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลใกล้เคียงและเท่ากับเอนไซม์ CGTase จากทรานสฟอร์แมนท์SV5 ด้วยเอสดีเอส-โพลีอะไครลาไมด์เจลอิเลคโตรโฟรีซิส |
| บรรณานุกรม | : |
สุรศักดิ์ ศิริพรอดุลศิลป์ . (2535). การโคลนยีนไซโคลเดกซ์ทริน กลูคาโนทรานสเฟอเรส จาก BacillusA(,11) ใน Escheichia cili.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. สุรศักดิ์ ศิริพรอดุลศิลป์ . 2535. "การโคลนยีนไซโคลเดกซ์ทริน กลูคาโนทรานสเฟอเรส จาก BacillusA(,11) ใน Escheichia cili".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. สุรศักดิ์ ศิริพรอดุลศิลป์ . "การโคลนยีนไซโคลเดกซ์ทริน กลูคาโนทรานสเฟอเรส จาก BacillusA(,11) ใน Escheichia cili."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2535. Print. สุรศักดิ์ ศิริพรอดุลศิลป์ . การโคลนยีนไซโคลเดกซ์ทริน กลูคาโนทรานสเฟอเรส จาก BacillusA(,11) ใน Escheichia cili. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2535.
|
