| ชื่อเรื่อง | : | การพัฒนาระบบการถ่ายทอดยีนสำหรับ ~iSpirulina platensis~i |
| นักวิจัย | : | สุดารัตน์ ดุลสวัสดิ์ |
| คำค้น | : | ไซยาโนแยคทีเรีย , ~iSpirulina platensis~i , การถ่ายทอดยีน , อิเล็กโตรโพเรชั่น , CYNANOBACTERIA , ~iSPIRULINA PLATENSIS~i , GENE TRANSFER , ELECTROPORATION |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2545 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=2019 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | Restriction enzyme เป็นปัญหาสำคัญที่ส่งผลต่อประสิทธิภาพการส่งถ่ายยีน เข้าสู่ไซยาโนแบคทีเรีย เพื่อพัฒนาระบบการถ่ายทอดยีนสำหรับ ~iS. platensis~i C1 ให้มีประสิทธิภาพ ในการทดลองได้ทำการตรวจหา reatriction enzyme ซึ่งคาดว่าจะมีผลต่ประสิทธิภาพการส่งถ่ายดีเอ็นเอใน ~iS. platensis~i C1 โดยการปรียบเทียบ (+,l)DNA ที่ถูกย่อยด้วย lysate R ซึ่งมี reatriction enzyme จาก ~iS. platensis~i C1 กับ (+,l)DNA ที่ถูกย่อยด้วยเอนไซม์ ~iHae~iIII พบว่า ใน ~iS. platensis~i C1 มีเอนไซม์ที่สามารถตัดดีเอ็นเอที่มีลำดับเบสตรงกัน (isoschizomer) กับ ~iHae~iIII ได้ เพื่อป้องกันไม่ให้พลาสมิดถูกย่อยด้วย เอนไซม์นี้ และสามารถส่งถ่ายเข้าสู่ ~iS. platensis~i C1 ได้อย่างเสถียร ในการทดลอง จึงได้สร้างพลาสมิดที่มียีน ~iBsp~iRI methylase (isoschizomer ของ ~iHae~iIII methylase) มียีนดื้อต่อยา spectinomycin และ multiple cloning sites (MCS) แทรกอยู่ตรงกลางยีน ~ipsbAI~i ของ ~iS. platensis~i C1 ที่ใช้เป็น homologous sequence ซึ่งพลาสมิคที่สร้างขึ้นนี้จะมีคุณสมบัติที่สามารถป้องกัน พลาสมิดจากการถูกย่อยด้วย restriction enzyme ใน ~iS. platensis~i C1 และ สามารถแทรกเข้าไปในโครโมโซมของ ~iS. platensis~i C1 ได้อย่างเสถียรแบบ double crossing over นอกจากนี้ MCS ที่สร้างขึ้นในพลาสมิดยังสามารถนำไปใช้สำหรับโคลนยีน ที่สนใจได้ต่อไป เมื่อทำการส่งถ่ายพลาสมิด pMG67 ความเข้มข้น 10 หรือ 50 (+,m)g เข้าสู่ ~iS. platensis~i C1 ด้วยวิธี electroporation พบว่า เซลที่ ได้รับพลาสมิด pMG67 ซึ่งผ่านการ methylate ที่บริเวณ ~iHae~iIII สามารถเจริญบน อาหารที่มียา spectinomycin ได้นานกว่าเซลที่ได้รับพลาสมิดที่ไม่ได้ผ่านการ methylate โดยพบว่า เซลที่ได้รับ methylate พลาสมิดสามารถเจริญบนอาหารที่มี ความเข้มข้นยา spectinomycin 0.5 (+,m)g/ml ได้นาน 27-30 วัน แต่อย่างไรก็ตาม transformant ที่ได้ยังไม่เสถียร โดย transformant ได้ตายไปก่อนที่สามารถนำมา subculture ได้ และเมื่อนำ transformant ที่ได้รับ methylate พลาสมิด ซึ่งเจริญ อยู่ในอาหารเหลวที่มีความเข้มข้นยา spectinomycin 0.5 (,m)g/ml มาทำการตรวจหา พลาสมิดใน transformant ด้วยวิธี PCR พบว่า ไม่มีชิ้นส่วนของพลาสมิดใน transformant แสดงให้เห็นว่า transformant ที่ได้เสถียร ซึ่งอาจเกิดจากยีนดื้อ ต่อยา spectinomycin มีการแสดงออกเพียงชั่วคราว (transient expression) รวมทั้งเกิดจากการสูญเสียของพลาสมิดในระหว่างการคัดเลือก transformant บนอาหารที่มียา จึงทำให้ไม่สามารถตรวจพบพลาสมิดใน transformant ได้ ซึ่งถึงแม้ในการทดลองนี้จะไม่ได้รับ transformant ที่มีความเสถียรวิธีการ ที่ได้พัฒนาขึ้นในการทดลองนี้ อาจจะใช้เป็นแนวทางในการพัฒนาระบบการถ่ายทอดยีน สำหรับ ~iS. platensis~i C1 ซึ่งพบว่า restriction enzyme เป็นปัญหาสำคัญที่มี ผลต่อความไม่เสถียรของการส่งถ่ายพลาสมิดเข้าสู่ ~iS. platensis~i C1 |
| บรรณานุกรม | : |
สุดารัตน์ ดุลสวัสดิ์ . (2545). การพัฒนาระบบการถ่ายทอดยีนสำหรับ ~iSpirulina platensis~i.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. สุดารัตน์ ดุลสวัสดิ์ . 2545. "การพัฒนาระบบการถ่ายทอดยีนสำหรับ ~iSpirulina platensis~i".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. สุดารัตน์ ดุลสวัสดิ์ . "การพัฒนาระบบการถ่ายทอดยีนสำหรับ ~iSpirulina platensis~i."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2545. Print. สุดารัตน์ ดุลสวัสดิ์ . การพัฒนาระบบการถ่ายทอดยีนสำหรับ ~iSpirulina platensis~i. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2545.
|
