โครงการนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อระบุตำแหน่งของยีน hsp70 และ sxl บนแผนที่มาตรฐานของโพลีทีนโครโมโซมของแมลงริ้นดำในประเทศไทย และเพื่อสร้างแผนที่เครื่องหมายพันธุกรรม Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) บนแผนที่มาตรฐานของโพลีทีนโครโมโซมของแมลงริ้นดำในประเทศไทย เก็บตัวอย่างแมลงริ้นดำจากแหล่งอาศัยตามธรรมชาติ จำแนกชนิดโดยใช้ลักษณะสัณฐานวิทยาและเซลล์พันธุศาสตร์โดยเปรียบเทียบแบบแผนการเรียงตัวของแบนด์โพลีทีนโครโมโซม สกัดดีเอ็นเอจากตัวอ่อนและเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมในส่วนของยีน hsp70, sxl, 18S rRNA และเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมด้วยเทคนิค RAPD นำมาสังเคราะห์ DNA probe โดยกระบวนการ nick translation เพื่อใช้สำหรับระบุตำแหน่งยีนและการจัดทำแผนที่เครื่องหมายพันธุกรรมบนโพลีทีนโครโมโซมของแมลงริ้นดำด้วยเทคนิค fluorescence in situ hybridization (FISH) ผลการศึกษาพบว่าไม่สามารถเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของยีน sxl ได้ ยีน hsp70, 18S rRNA และเครื่องหมายพันธุกรรม RAPD สามารถระบุตำแหน่งของบนโพลีทีนโครโมโซมของแมลงริ้นดำและหนอนแดง Chironomus circumdatus ได้ โดยยีน hsp70 มีตำแหน่งบนโพลีทีนโครโมโซมของแมลงริ้นดำ S. aureohirtum แท่งที่ 2 แขนข้างยาว (IIL) และบนโครโมโซมแขน A ของหนอนแดง C. circumdatus ตำแหน่งของยีน 18S rRNA อยู่บน nucleolar organizer (NOR) ของโพลีทีนโครโมโซมของ S. aureohirtum ซึ่งอยู่บนโครโมโซมแขนข้างยาวแท่งที่ 1 (IL) และ C. circumdatus ซึ่งอยู่บนโครโมโซม G การสร้างแผนที่เครื่องหมายพันธุกรรม RAPD สามารถระบุตำแหน่งของเครื่องหมายพันธุกรรม RAPD 2 ตำแหน่ง คือ เครื่องหมาย RAPD ขนาด 400 bp และขนาด 900 bp โดยเครื่องหมายพันธุกรรม RAPD ขนาด 400 bp มีตำแหน่งบนโครโมโซมแท่งที่ 1 แขนข้างยาว (IL) ของ S. aureohirtum สำหรับโพลีทีนโครโมโซมของ S. fenestratum พบว่า DNA probe hybridized บนโพลีทีนโครโมโซมแต่ไม่มารถระบุตำแหน่งได้เนื่องจากการกระจายของโพลีทีนโครโมโซมไม่ดี เช่นเดียวกับ RAPD ขนาด 900 bp การศึกษาเซลล์พันธุศาสตร์ของแมลงริ้นดำ S. angulistylum พบว่าเป็นสปีชีส์ซับซ้อนประกอบด้วย 3 cytoforms ได้แก่ cytoform A, B และ C โดยแต่ละ cytoform มีความแตกต่างทางนิเวศวิทยาของแหล่งอาศัยและความแตกต่างทางพันธุกรรมระดับอณูพันธุศาสตร์ จากการวิเคราะห์โดยใช้ลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีน cytochrome oxidase subunit I (COI) The objectives of this project are to localize hsp70 and sxl genes and to construct the RAPD genetic markers map on the polytene chromosome of the black fly using fluorescence in situ hybridization (FISH) technique. Black fly samples were collected from the natural habitats. Species were identified based on both morphology and cytology using the polytene chromosome banding patterns. DNA was extracted from the larva and the hsp70, sxl, and 18S rRNA genes and the RAPD marker were amplified. PCR products were used to synthesis DNA probe for FISH using the nick translation method. The hsp70 and 18S rRNA genes were successfully amplified but the sxl gene was unable to amplify. The hsp70, 18S rRNA and RAPD markers were successfully localized on the polytene chromosomes of black flies, Simulium aureohirtum and S. fenestratum and the chironomid, Chironomus circumdatus. The hsp70 gene was located on the long arm of chromosome II (IIL) of S. aureohirtum and the chromosome arm A of C. circumdatus. Gene 18S rRNA was located on the nucleolar organizer (NOR) region of the chromosome of both S. aureohirtum which present on the long arm of chromosome I (IL) and C. circumdatus which present on the chromosome arm G. Two RAPD markers (400 bp and 900 bp) were successfully located on the polytene chromosome of S. aureohirtum and S. fenestratum. The 400 bp RAPD marker was located on the long arm of chromosome I (IL) of S. aureohirtum but the chromosome arm that this marker hybridized was unable to identified on the polytene chromosome of S. fenestratum. The 900 bp RAPD marker was hybridized on the polytene chromosome of S. fenestratum but the chromosome arm was unable to identify. Cytogenetic study of S. angulistylum revealed that this species was a species complex composed of three cytoforms (A, B, C). The cytoforms were also differing ecologically and molecularly based on COI barcoding sequences.