สารไฟโตเอสโตรเจนเป็นที่นิยมในการรักษาแพทย์ทางเลือกสำหรับโรคหลายชนิด วัตถุประสงค์ของโครงการคือ ศึกษาผลการตายแบบอะพอพทิสของสารไฟโตเอสโตรเจน 9 ชนิด ได้แก่ ไบคาเลน, บิสฟีนอล เอ, นารินเจนนิน, ซีราลีโนน, เพอราริน, ไดอิดเซอิน, เจนนิสทีน, ไบโอแชนนิน เอและ เอพิเจนิน ต่อเซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวมนุษย์ HL-60 และ U937 และเซลล์เม็ดเลือดขาวปกติรวมทั้งกลไกการทำให้ตาย ได้แก่ ผลของสารไฟโตเอสโตรเจนต่อการผลิตสารอนุมูลอิสระ และลักษณะวัฏจักรเซลล์ การทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ใช้การวัดด้วย MTT หาค่าความเข้มข้นของสารไฟโตเอสโตรเจนที่เป็นพิษต่อเซลล์ร้อยละ 50 (IC50) และวัดค่าความต่างศักย์ไฟฟ้าของอะพอพโทติกเซลล์โดยใช้สาร 3, 3’-dihexyloxacarbocyanine iodide ด้วยเทคนิคโฟลไซโตมิเตอร์ การวัดความสามารถในการผลิตสารอนุมูลอิสระโดยใช้ 2’, 7’-dichlorofluorescein diacetate ด้วยเทคนิคโฟลไซโตมิเตอร์ ศึกษาลักษณะวัฏจักรเซลล์โดยย้อมเซลล์ด้วยโพรพิเดียมไอโอไดด์และเทคนิคโฟลไซโตเมทรี ศึกษากลไกในระดับโมเลกุลโดยวัดการทำงานของเอนไซม์คาสเพส-3 และ -8 โดยใช้สับสตรทที่ติดด้วยสารเรืองแสง เปรียบเทียบการแสดงออกของโปรตีนโดยเทคนิคโปรตีโอมิคส์ของเซลล์กลุ่มควบคุมและเซลล์ที่ให้สารซีราลีโนน ทำอิมมูโนบล็อทของโปรตีน cytochrome c, Bax, Bcl-2 และ Bcl-xL วัดระดับแคลเซียมในไมโตคอนเดรียและไซโตซอลเพื่อดูความสัมพันธ์ของไมโตคอนเดรียด้วย ตรวจการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับภาวะเครียดอีอาร์ที่ผิวเซลล์ด้วยแอนติบอดี้ต่อแคลเรติคูลิน ผลการทดลองพบว่า เซลล์ PBMCs ต้านต่อการกระตุ้นให้ตายจากสารไฟโตเอสโตรเจนมากกว่าเซลล์มะเร็ง สารไฟโตเอสโตรเจนทั้งหมดทำให้เซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวมนุษย์ HL-60 และU937 ตายยกเว้นสารเพอราริน สารไฟโตเอสโตรเจนทั้งหมดทำให้ศักย์ไฟฟ้าของไมโตคอนเดรียลเมมเบรนลดลงในเซลล์ U937 และ HL-60 ยกเว้นเพอราริน ในเซลล์ U937 ไบคาเลน (20 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) บิสฟีนอลเอ (20 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) นารินเจนนิน (50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ไบโอแชนนิน (10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และซีราลีโนน (10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร)ก่อให้เกิดสารอนุมูลอิสระ ส่วนในเซลล์ HL-60 สารนารินเจนนิน (250 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ซีราลีโนน (20 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และเพอราริน (50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ผลิตสารอนุมูลอิสระเปอร์ออกไซด์ ในเซลล์ U937 บิสฟีนอล นารินเจนนิน และ ซีราลีโนนทำให้วัฏจักรหยุดที่เฟส G2/M และก่อให้เกิดการแตกหักของดีเอ็นเอโดยการปรากฏของ subdiploid peak ในเทคนิคโฟลไซโตเมทรีในทำนองเดียวกัน ในเซลล์ HL-60 ไบคาเลน (50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) บิสฟีนอลเอ (50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) นารินเจนนิน (250 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ซีราลีโนน (50 ไมโครกรัม/ลิตร) เจนนิสทีน (50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) เอพิเจนนิน (50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และ ไบโอแชนนินเอ(50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ทำให้หยุดที่ G2M แต่ซีราลีโนนที่ความเข้มข้นต่ำกว่า (10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ทำให้วัฏจักรเซลล์หยุดที่ G0/G1 การทำงานของเอนไซม์คาสเพส-3 สูงขึ้นเมื่อความเข้มข้นของไฟโตเอสโตรเจนเพิ่มขึ้นในเซลล์ HL-60 เมื่อกระตุ้นด้วย ไบคาเลน นารินเจนนิน บิสฟีนอลเอ และ ซีราลีโนน ส่วนในการตายอะพอพโทสิสของเซลล์ U937 เอนไซม์คาสเพส-3 เพิ่มขึ้นเป็นไปตาม dose response เมื่อกระตุ้นด้วย ไบคาเลน ไบโอแชนนินเอ นารินเจนนิน บิสฟีนอลเอและซีราลีโนน ซีราลีโนนเป็นไฟโตเอสโตรเจนที่สร้างจากเชื้อราในสายพันธุ์ Fusarium เช่น F. graminearum ค่าเปอร์เซ็นต์การตายที่ 50 ของซีราลีโนนในการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ HL-60, U937 และเซลล์เม็ดเลือดขาวปกติเท่ากับ 44, 5.1 และมากกว่า 80 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ตามลำดับ เซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวเมื่อได้รรับสารไฟโตเอสโตรเจนซีราลีโนนจะมีรูปร่างเซลล์เข้าได้กับอะพอพโทติกเซลล์หลังจากย้อมด้วยโพรพิเดียมไอโอไดด์ และดูด้วยกล้องฟลูโอเรสเซนส์ ซีราลีโนนทำให้ศักย์ไฟฟ้าของไมโตคอนเดรียลเมมเบรนลดลงตาม dose response และก่อให้เกิดการหลั่ง cytochrome c ไปที่ไซโตซอล แสดงถึงความสัมพันธ์กับไมโตคอนเดรีย การทำงานของเอนไซม์คาสเพส-3 เพิ่มขึ้นเป็น dose response ขณะที่การทำงานของคาสเพส-8 เป็นแบบ time dependent จากการศึกษาโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเลคโตรโฟรีสิสแบบ 2 มิติหรือโปรตีโอมิคส์ เซลล์ U937 ที่ได้รับซีราลีโนนมีโปรตีนที่แตกต่างกัน 3 ชนิด คือ fructose bisphosphate aldolase A, muscle type, lung cancer antigen NY LU 1; glyeraldehyde 3-phosphate dehydrogenase และ deoxyuridine triphosphate nucleotidohydrolase, mitochondrial precursor ส่วนโปรตีโอมิคส์ของเซลล์ HL-60 เมื่อให้ซีราลีโนนนาน 24 ชั่วโมง แสดงโปรตีนที่มีการแสดงออกแตกต่างกัน 23 ชนิด ได้แก่ โปรตีนในภาวะเครียดอีอาร์ คือ 78 kDa glucose-regulated protein (GRP78), heat shock protein 90 และ แคลเรติคูลิน ซีราลีโนนกระตุ้นการเพิ่มขึ้นของแคลเซียมไออนในไมโตคอนเดรียและไซโตซอล ไม่มีการเคลื่อนย้ายของแคลเรติคูลิน (โปรตีนของภาวะเครียดอีอาร์) จากอีอาร์ไปที่เซลล์เมมเบรนที่ 1 ชั่วโมงของการให้สารซีราลีโนน การแสดงออกของโปรตีน Bax เพิ่มขึ้นตามเวลา และการแสดงออกของ Bcl-xL ลดลงเมื่อเมื่อทำอิมมูโนบล็อต สาร wortmannin และ MEK inhibitor (PD98059) มีฤทธิ์เสริมกับซีราลีโนนในการกระตุ้นเซลล์มะเร็งมนุษย์ให้ตายแบบอะพอพโทสิส ยาเคมีบำบัดวินบลาสตินมีฤทธิ์เสริมในการทำให้เซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวตายแบบอะพอพโทสิสโดยไปลดศักย์ไฟฟ้าของไมโตคอนเดรียลเมมเบรน โดยสรุป ไฟโตเอสโตรเจนทั้ง 9 ตัวสามารถทำให้เซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวตายแบบอะพอพโทสิสโดยไปลดศักย์ไฟฟ้าของไมโตคอนเดรียลเมมเบรน และคาสเพส-3 นอกจากนี้ กลไกในระดับโมเลกุลของการตายแบบอะพอพโทสิสในเซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวเมื่อกระตุ้นด้วยซีราลีโนนสัมพันธ์กับการทำงานของคาสเพส-8 ภาวะเครียดอีอาร์ ดังนั้น แสดงว่า วิถีการตายเกี่ยวข้องกับวิถีภายใน (ไมโตคอนเดรีย) วิถีภายนอกและภาวะเครียดอีอาร์