ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี
นักวิจัย : ปรินทร์ ชัยวิสุทธางกูร
คำค้น : immunohistochemistry , VP19 , VP26 , การแสดงออกของโปรตีน , โมโนโคลนอลแอนติบอดี , ไวรัสจุดขาว
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2553
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=RMU4980011 , http://research.trf.or.th/node/5301
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ไวรัสจุดขาว (white spot syndrome virus; WSSV) เป็นไวรัสที่สำคัญที่ก่อให้เกิดโรคในกุ้งสกุลPenaeus ชนิดต่าง ๆ สามารถทำให้เกิดการตายได้ถึง 100% ภายในเวลา 3-10 วันหลังจากติดเชื้อวัตถุประสงค์ของงานวิจัยนี้เป็นการพัฒนาวิธีตรวจวินิจฉัยทางด้านอิมมูโนโลยี เพื่อเป็นอีกทางเลือกหนึ่งแก่เกษตรกรในการตรวจการติดเชื้อ WSSV โดยอาศัยการโคลนและการแสดงออกของโปรตีนโครงสร้างVP19 และ VP26 ของ WSSV เพื่อนำมาใช้เป็นแอนติเจนในการสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดี ที่สามารถช่วยเสริมกับแอนติบอดีต่อ VP28 ทำให้มีความไวในการตรวจวินิจฉัยสูงขึ้น ได้ทำการโคลนยีน VP19 เข้าสู่เวกเตอร์ pMAL-C2 และกระตุ้นให้แสดงออกในรูปของ maltose binding protein (MBP)-VP19 จากนั้นนำ fusion protein ที่ได้ไปปลูกภูมิคุ้มกันในหนูขาวเพื่อสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดี (monoclonal antibody; MAb) พบว่า MAb สามารถตรวจการติดเชื้อ WSSV ตามธรรมชาติในกุ้งขาวได้โดยวิธี dot blotting, western blotting และ immunohistochemistry โดยไม่ทำปฏิกิริยาข้ามกับไวรัสชนิดอื่นได้แก่ Taura syndrome virus (TSV), yellow head virus (YHV),monodon baculovirus (MBV) และ hepatopancreatic parvovirus (HPV) MAb W25-8D ที่จำเพาะต่อ VP19 มีความไวประมาณ 1.2 fmole/จุด เมื่อใช้โปรตีน MBP-VP19 บริสุทธิ์ในการทดสอบโดยวิธี dot blotting เมื่อนำ MAb W25-8D นี้ไปใช้ร่วมกับ MAb W29 ที่จำเพาะต่อ VP28 ในการตรวจสารสกัดจากกุ้งที่ติดเชื้อ WSSV โดยวิธี dot blotting พบว่ามีความไวสูงขึ้น 2 เท่าแต่ยังคงมีความไวต่ำกว่าวิธี onestep PCR 25,000 เท่า เมื่อนำ MAb W25-8D มาใช้ตรวจการติดเชื้อในเนื้อเยื่อโดยวิธีimmunohistochemistry พบว่าสามารถตรวจพบ VP19 ได้ทั้งในนิวเคลียสและไซโตพลาซึม ซึ่งแตกต่างจาก MAb W29 ที่สามารถตรวจพบ VP28 ได้เฉพาะในนิวเคลียสเท่านั้น ในกรณีของ VP26 ได้ทำการโคลนยีน VP26 ที่ปราศจากส่วน transmembrane เข้าสู่เวกเตอร์ pQE30 และกระตุ้นให้แสดงออกในรูปของ 6xHis-VP26 จากนั้นนำ fusion protein ที่ได้ไปปลูกภูมิคุ้มกันในหนูขาวเพื่อสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดี พบว่า MAb สามารถตรวจการติดเชื้อ WSSV ตามธรรมชาติในกุ้งขาวได้โดยวิธี dot blotting, western blotting และ immunohistochemistry โดยไม่ทำปฏิกิริยาข้ามกับไวรัสชนิดอื่นได้แก่ TSV, YHV, MBV และ infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) เมื่อนำ MAb W26-3 นี้ไปใช้ในการตรวจสารสกัดจากกุ้งที่ติดเชื้อ WSSV โดยวิธี dot blotting พบว่ามีความไวต่ำกว่า MAb W29 ที่จำเพาะต่อ VP28 ประมาณ 2 เท่า เมื่อนำ MAb W26-3 มาใช้ตรวจการติดเชื้อในเนื้อเยื่อโดยวิธี immunohistochemistry พบว่ารูปแบบของimmunoreactivity เหมือนกับของ VP28 คือสามารถตรวจพบได้เฉพาะในนิวเคลียสเท่านั้น

บรรณานุกรม :
ปรินทร์ ชัยวิสุทธางกูร . (2553). การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
ปรินทร์ ชัยวิสุทธางกูร . 2553. "การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
ปรินทร์ ชัยวิสุทธางกูร . "การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2553. Print.
ปรินทร์ ชัยวิสุทธางกูร . การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2553.