| ชื่อเรื่อง | : | การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี |
| นักวิจัย | : | ปรินทร์ ชัยวิสุทธางกูร |
| คำค้น | : | immunohistochemistry , VP19 , VP26 , การแสดงออกของโปรตีน , โมโนโคลนอลแอนติบอดี , ไวรัสจุดขาว |
| หน่วยงาน | : | สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2553 |
| อ้างอิง | : | http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=RMU4980011 , http://research.trf.or.th/node/5301 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ไวรัสจุดขาว (white spot syndrome virus; WSSV) เป็นไวรัสที่สำคัญที่ก่อให้เกิดโรคในกุ้งสกุลPenaeus ชนิดต่าง ๆ สามารถทำให้เกิดการตายได้ถึง 100% ภายในเวลา 3-10 วันหลังจากติดเชื้อวัตถุประสงค์ของงานวิจัยนี้เป็นการพัฒนาวิธีตรวจวินิจฉัยทางด้านอิมมูโนโลยี เพื่อเป็นอีกทางเลือกหนึ่งแก่เกษตรกรในการตรวจการติดเชื้อ WSSV โดยอาศัยการโคลนและการแสดงออกของโปรตีนโครงสร้างVP19 และ VP26 ของ WSSV เพื่อนำมาใช้เป็นแอนติเจนในการสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดี ที่สามารถช่วยเสริมกับแอนติบอดีต่อ VP28 ทำให้มีความไวในการตรวจวินิจฉัยสูงขึ้น ได้ทำการโคลนยีน VP19 เข้าสู่เวกเตอร์ pMAL-C2 และกระตุ้นให้แสดงออกในรูปของ maltose binding protein (MBP)-VP19 จากนั้นนำ fusion protein ที่ได้ไปปลูกภูมิคุ้มกันในหนูขาวเพื่อสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดี (monoclonal antibody; MAb) พบว่า MAb สามารถตรวจการติดเชื้อ WSSV ตามธรรมชาติในกุ้งขาวได้โดยวิธี dot blotting, western blotting และ immunohistochemistry โดยไม่ทำปฏิกิริยาข้ามกับไวรัสชนิดอื่นได้แก่ Taura syndrome virus (TSV), yellow head virus (YHV),monodon baculovirus (MBV) และ hepatopancreatic parvovirus (HPV) MAb W25-8D ที่จำเพาะต่อ VP19 มีความไวประมาณ 1.2 fmole/จุด เมื่อใช้โปรตีน MBP-VP19 บริสุทธิ์ในการทดสอบโดยวิธี dot blotting เมื่อนำ MAb W25-8D นี้ไปใช้ร่วมกับ MAb W29 ที่จำเพาะต่อ VP28 ในการตรวจสารสกัดจากกุ้งที่ติดเชื้อ WSSV โดยวิธี dot blotting พบว่ามีความไวสูงขึ้น 2 เท่าแต่ยังคงมีความไวต่ำกว่าวิธี onestep PCR 25,000 เท่า เมื่อนำ MAb W25-8D มาใช้ตรวจการติดเชื้อในเนื้อเยื่อโดยวิธีimmunohistochemistry พบว่าสามารถตรวจพบ VP19 ได้ทั้งในนิวเคลียสและไซโตพลาซึม ซึ่งแตกต่างจาก MAb W29 ที่สามารถตรวจพบ VP28 ได้เฉพาะในนิวเคลียสเท่านั้น ในกรณีของ VP26 ได้ทำการโคลนยีน VP26 ที่ปราศจากส่วน transmembrane เข้าสู่เวกเตอร์ pQE30 และกระตุ้นให้แสดงออกในรูปของ 6xHis-VP26 จากนั้นนำ fusion protein ที่ได้ไปปลูกภูมิคุ้มกันในหนูขาวเพื่อสร้างโมโนโคลนอลแอนติบอดี พบว่า MAb สามารถตรวจการติดเชื้อ WSSV ตามธรรมชาติในกุ้งขาวได้โดยวิธี dot blotting, western blotting และ immunohistochemistry โดยไม่ทำปฏิกิริยาข้ามกับไวรัสชนิดอื่นได้แก่ TSV, YHV, MBV และ infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) เมื่อนำ MAb W26-3 นี้ไปใช้ในการตรวจสารสกัดจากกุ้งที่ติดเชื้อ WSSV โดยวิธี dot blotting พบว่ามีความไวต่ำกว่า MAb W29 ที่จำเพาะต่อ VP28 ประมาณ 2 เท่า เมื่อนำ MAb W26-3 มาใช้ตรวจการติดเชื้อในเนื้อเยื่อโดยวิธี immunohistochemistry พบว่ารูปแบบของimmunoreactivity เหมือนกับของ VP28 คือสามารถตรวจพบได้เฉพาะในนิวเคลียสเท่านั้น |
| บรรณานุกรม | : |
ปรินทร์ ชัยวิสุทธางกูร . (2553). การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี.
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย. ปรินทร์ ชัยวิสุทธางกูร . 2553. "การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี".
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย. ปรินทร์ ชัยวิสุทธางกูร . "การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี."
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2553. Print. ปรินทร์ ชัยวิสุทธางกูร . การโคลนและการแสดงออกของโปรตีนVP19และVP26ของไวรัสตัวแดงดวงขาวและการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2553.
|
