13.1 ศึกษาค้นคว้าเอกสารและข้อมูลที่เกี่ยวข้อง 13.2 ออกแบบวิธีการทดลอง 13.3 เก็บตัวอย่างดิน เก็บตัวอย่างดินตะกอนป่าชายเลนในจังหวัดจันทบุรี โดยทำการสุ่มเก็บตัวอย่างโดยใช้อุปกรณ์เก็บตัวอย่างดิน (Grab) นำตัวอย่างดิน เก็บไว้ที่ 4-10 องศาเซลเซียสและทำการคัดแยกเชื้อแบคทีเรียทันที เมื่อตัวอย่างถึงห้องปฏิบัติการ 13.4 การแยกและคัดเลือกแบคทีเรียที่สร้างอัลคาไลน์โปรติเอส 13.4.1 การแยกเชื้อแบคทีเรียที่สร้างอัลคาไลน์โปรติเอสจากตัวอย่างดิน นำตัวอย่างดินมาละลายและเจือจางเป็นลำดับในน้ำกลั่นปลอดเชื้อจากนั้น กระจายตัวอย่างที่เจือจางแล้วให้ ทั่วผิวหน้าอาหารแข็ง skimmed milk agar (SKA) ที่ปรับค่าพีเอชของอาหารเท่ากับ 8.0 บ่มเชื้อที่อุณหภูมิห้อง เป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง ทำการตรวจผลการสร้างเอนไซม์อัลคาไลน์โปรติเอส โดยสังเกตบริเวณใสที่เกิดขึ้นรอบโคโลนีเชื้อ ถ้ามีบริเวณใส แสดงว่าแบคทีเรียนั้นสามารถสร้างเอนไซม์ได้ และแยกเชื้อแบคทีเรียที่สร้างวงใสรอบโคโลนี โดยใช้ loop เขี่ยเชื้อนำมาลากซ้ำบนจานอาหาร nutrient agar ใหม่ (cross streak plate method) จนได้เชื้อแบคทีเรียสายพันธุ์บริสุทธิ์ เก็บเชื้อบริสุทธิ์โดยเลี้ยงเชื้