วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2549

งานวิจัยนี้ได้โคลนและหาลำดับจีโนมิกดีเอ็นเอของยีนเดกซ์แทรนเนสจาก Penicillium sp.SMCU 3-14 โดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสด้วยชุด BD GenomeWalker[superscript TM] Universal Kit โดยตัดจีโนมิกดีเอ็นเอของรานี้ด้วยเรสทริกชันเอนไซม์ชนิดต่างๆ แล้วเชื่อมเข้ากับอะแด๊ปเตอร์ จากนั้นเพิ่มจำนวนชิ้นส่วนของยีนเดกซ์แทรนเนสด้วยไพรเมอร์ 2 คู่(Dex6R กับ AP2 และ Dex4F กับ AP2) แล้วโคลนผลิตภัณฑ์ PCR ขนาด 2.5 กิโลเบส และ 2.4กิโลเบสเข้าในเวกเตอร์ ระบุรีคอมบิแนนท์พลาสมิดที่ได้เป็น pPT-4 และ pPT-5 ตามลำดับ เมื่อวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ของ PT-4และ PT-5 พบว่ามีความเหมือน 92% และ 96% ตามลำดับ กับปลายด้าน 5’(ก่อนโปรโมเตอร์)และปลายด้าน 3’(หลังกรอบอ่านรหัสเปิด) ของเดกซ์แทรนเนสของ Penicillium minioluteum HI-4 ดังนั้นเพื่อให้ได้ยีนประมวลรหัสเดกซ์แทรนเนสของ Penicillium sp.SMCU 3-14 (SMCU-dex) ที่สมบูรณ์อยู่ภายในชิ้นเดียวกันได้ใช้ข้อมูลที่จำเพาะต่อดีเอ็นเอบริเวณปลายด้าน 5’ ของPT-4 และปลายด้าน 3' ของ PT-5 ออกแบบ forward primer และ reverse primer ตามลำดับ เพิ่มชิ้นส่วนของ SMCU-dex โดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส แล้วโคลนผลิตภัณฑ์ PCR เข้าในเวกเตอร์ ระบุรีคอมบิแนนท์พลาสมิดที่ได้เป็นpPT-6 เมื่อวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ของชิ้นดีเอ็นเอทั้งหมดที่โคลนได้ พบตำแหน่งของโปรโมเตอร์ซึ่งประกอบด้วย CAAT Box และ TATA Box ที่มีลำดับนิวคลิโอไทด์เป็น CCAATและ TATAA ตามลำดับ และพบ Poly A signal ที่มีลำดับนิวคลีโอไทด์เป็น AATAAGกรอบอ่านรหัสเปิดของ SMCU-dex มีขนาด 1824 คู่เบส ที่ไม่มีอินทรอนและประมวลรหัสให้โปรตีนที่ประกอบด้วยกรดอะมิโน 608 หมู่ขนาดประมาณ 66 กิโลดาลตัน ที่บริเวณปลาย N-terminal พบ signal peptide ที่ประกอบด้วยกรดอะมิโนยาว 20 หมู่ เมื่อเปรียบเทียบความเหมือนของโปรตีน SMCU-DEX พบว่ามีความเหมือน 99% กับเดกซ์เเทรนเนสของ Penicillium minioluteum HI-4 ผลการทดลองจากเซาเทิร์นไฮบริไดเซชัน แสดงว่ามี SMCU-dex เพียงหนึ่งชุดในโครโมโซมของรานี้ ผลการวิเคราะห์ลำดับเบสบริเวณ ITS1-5.8S-ITS2 ระบุว่า ราสายพันธุ์นี้มีความเหมือน 100% กับ Penicillium pinophilum งานวิจัยนี้จึงเป็นงานวิจัยแรกที่เสนอข้อมูลจากยีนเดกซ์แทรนเนสของราสายพันธุ์นี้