| ชื่อเรื่อง | : | ลำดับเบสและการวิเคราะห์หาจุดเริ่มต้นการถอดรหัสของโปรโมเตอร์ของ ~iSynechococcus~i PCC7942 ที่มีลักษณะไม่คล้ายกับโปรโมเตอร์ของ ~iE.coli~i |
| นักวิจัย | : | ศิริรัตน์ ฟ้าอรุณสวัสดิ์ |
| คำค้น | : | TRANSCRIPTION INITIATION SITE , NON-~iE. COLI~i-LIKE PROMOTER , CYANOBACTERIA , ~iSYNECHOCOCCUS~i PCC7942 , (+,b)-GLUCURONIDASE |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2541 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=42945 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | มีการใช้ไซยาโนแบคทีเรียเป็นเจ้าบ้านเพื่อการแสดงออกของยีน heterologous อย่างไรก็ดีระดับการแสดงออกของยีน heterologous ยังอยู่ในระดับที่ต่ำกว่าเมื่อใช้ ~iE.coli~i เป็นเจ้าบ้านซึ่งอาจมีสาเหตุมาจากการใช้โปรโมเตอร์ที่อ่อนแอ การใช้ endogenous strong promoter อาจช่วยในการปรับปรุงการแสดงออกของยีน heterologous ได้ดีขึ้น การศึกษานี้ได้ใช้ ~iSynechococcus~i PCC7942 เป็น model system ในการศึกษา คุณลักษณะของโปรโมเตอร์ของไซยาโนแบคทีเรีย ได้ศึกษาพาสมิด pKG-E14 ซึ่งมีชิ้น โปรโมเตอร์แข็งขัน E14 ขนาด 1.6 kb อยู่บริเวณด้านหน้าของยีนรายงาน promoterles- (+,b)-glucuronidase ~i(GUS)~i GUS activity ของ Synechococcus ที่มี pKG-E14 คือ 313.79 ((+,-)19.27 nmole MU/min/mg protein เพื่อหาตำแหน่งโปรโมเตอร์ จึงทำ deletion analysis ของชิ้นดีเอ็นเอ E14 ได้อนุพันธ์พลาสมิด pKG-E14D1, pKG-E14D2, pKG-E14D3 และ pKG-E14D4 แล้ววัด GUS activity ผลการทดลองพบว่า GUS activity ของ ~iSynechococcus~i ที่มี pKG-E14D2 สูงเทียบเท่ากับที่มี pKG-E14 ได้ใช้วิธี 5RACE-PCR เพื่อวิเคราะห์หาจุดตั้งต้นของการถอดรหัสเพื่อใช้วิเคราะห์หา ตำแหน่ง inferred promoter พบว่า -10 และ -35 regions ของการถอดรหัส ส่วนใหญ่ของ E14-GUS คือ TAgcAT และ TcGAtc ตามลำดับ ไม่พบ -10 region ของการถอดรหัสส่วนใหญ่ของ E14D2-GUS แต่พบ -35 region คือ TcGAgc -10 และ -35 regions ของการถอดรหัสส่วนน้อยของ E14D2 คือ cAgAAg และ gcGACc ตามลำดับ ซึ่งจะเห็นได้ว่า -10 และ -35 regions ของโปรโมเตอร์ E14 และ E14D2 มีส่วนคล้าย ลำดับเบสที่พบในความถี่ต่ำของ E.coli (+,s)(70) promoter consensus ผลการ ทดลองนี้สอดคล้องกับข้อมูลที่ว่าชิ้นดีเอ็นเอโปรโมเตอร์ E14 และ E14D2 สามารถทำงานได้ ใน ~iSynechococcus~i แต่ไม่ทำงานใน ~iE.coli~i ผลของ deletion analysis ยังบ่งชี้ ว่ามี distance enhancing element อยู่ที่ upstream ของ inferred promoter ของ E14D2 ซึ่งมีบทบาทต่อการแสดงออกของยีน GUS เนื่องจากไม่พบว่ามีลำดับเบสใดๆ ในฐานข้อมูลที่คล้ายกับ E14 อย่างมีนัยสำคัญ จึงยังไม่ทราบว่าโปรโมเตอร์ E14 และ E14D2 เป็นของยีนใด |
| บรรณานุกรม | : |
ศิริรัตน์ ฟ้าอรุณสวัสดิ์ . (2541). ลำดับเบสและการวิเคราะห์หาจุดเริ่มต้นการถอดรหัสของโปรโมเตอร์ของ ~iSynechococcus~i PCC7942 ที่มีลักษณะไม่คล้ายกับโปรโมเตอร์ของ ~iE.coli~i.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. ศิริรัตน์ ฟ้าอรุณสวัสดิ์ . 2541. "ลำดับเบสและการวิเคราะห์หาจุดเริ่มต้นการถอดรหัสของโปรโมเตอร์ของ ~iSynechococcus~i PCC7942 ที่มีลักษณะไม่คล้ายกับโปรโมเตอร์ของ ~iE.coli~i".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. ศิริรัตน์ ฟ้าอรุณสวัสดิ์ . "ลำดับเบสและการวิเคราะห์หาจุดเริ่มต้นการถอดรหัสของโปรโมเตอร์ของ ~iSynechococcus~i PCC7942 ที่มีลักษณะไม่คล้ายกับโปรโมเตอร์ของ ~iE.coli~i."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2541. Print. ศิริรัตน์ ฟ้าอรุณสวัสดิ์ . ลำดับเบสและการวิเคราะห์หาจุดเริ่มต้นการถอดรหัสของโปรโมเตอร์ของ ~iSynechococcus~i PCC7942 ที่มีลักษณะไม่คล้ายกับโปรโมเตอร์ของ ~iE.coli~i. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2541.
|
