| ชื่อเรื่อง | : | การควบคุมการทำงานและลำดับเบสของโปรโมเตอร์แข็งขันของไซยาโนแบคทีเรีย Synechococcus PCC7942 |
| นักวิจัย | : | วิภา จึงจตุพรชัย |
| คำค้น | : | Cyanobacteria , Enhancer , Light-intensity-regulated promoter , Strong promoters , tRNA |
| หน่วยงาน | : | สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2546 |
| อ้างอิง | : | http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=RSA4380011 , http://research.trf.or.th/node/1595 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ไซยาโนแบคทีเรีย ได้รับความสนใจในการนำไปใช้ด้านเทคโนโลยีชีวภาพ แต่มีอุปสรรค คือระดับการแสดงออกของ heterologous genes ค่อนข้างต่ำ การใช้โปรโมเตอร์แข็งขันเป็นวิธีหนึ่งที่ จะปรับปรุงให้ระดับการแสดงออกของยีนให้สูงขึ้น อย่างไรก็ดีความรู้เกี่ยวกับโปรโมเตอร์ในไซยาโน แบคทีเรียมีจำกัด เพื่อศึกษาโครงสร้างและหน้าที่ของโปรโมเตอร์ในไซยาโนแบคทีเรีย ผู้วิจัยจึงได้ ศึกษาคุณลักษณะของชิ้นดีเอ็นเอโปรโมเตอร์ 3 ชิ้น ที่แยกได้จาก Synechococcus PCC7942 ได้แก่ ชิ้นดีเอ็นเอโปรโมเตอร์ E3, E10 และ E14D2 ชิ้นดีเอ็นเอโปรโมเตอร์ E3 มียีน tRNApro ซึ่งอยู่ที่ upstream ของยีน promoterless GUS โปรโมเตอร์ของยีน tRNApro อยู่บริเวณ upstream ของ coding sequence เมื่อศึกษา 5’ end ของ tRNApro-GUS transcripts ของพลาสมิด pKG-E3 พบว่า true transcription initiation sites อยู่ บริเวณ upstream ของ tRNApro coding sequence ส่วน processed sites อยู่บริเวณ downstream นอกจากนี้ได้ศึกษาบริเวณของยีน tRNApro ที่มีผลกระทบต่อการแสดงออกของยีน GUS ด้วย ชิ้นดีเอ็นเอโปรโมเตอร์ E10 ซึ่งตอบสนองต่อความเข้มของแสง ได้ศึกษาคุณลักษณะของ บริเวณที่ทำหน้าที่เป็น basal promoter activity, positive regulator และ light-intensity response พบว่าชิ้นดีเอ็นเอโปรโมเตอร์ E10 ตอบสนองต่อความเข้มแสงสูงในระดับ transcription และอาจเป็น โปรโมเตอร์ที่ควบคุมการแสดงออกของยีน ORF76 ใน Synechococcus chromosome ชิ้นดีเอ็นเอโปรโมเตอร์ E14D2 ซึ่งมี distance enhancer ได้ตรวจวิเคราะห์ transcription initiation sites ของ E14D2-GUS แล้ว นอกจากนี้พบว่าบริเวณ nt.-226 to nt – 630 ซึ่งเป็นส่วนที่จำ เป็นต่อการทำงานของโปรโมเตอร์ มีส่วนของ putative LysR transcription activator binding site การทดลอง Electrophoresis mobility shift assay บ่งชี้ว่าบริเวณดังกล่าวมีลักษณะเป็น DNA-protein binding site เราสามารถนำโปรโมเตอร์แข็งขันจากงานวิจัยนี้ ไปใช้ในการสร้างโปรตีนที่มีค่าทาง เศรฐกิจโดยใช้ไซยาโนแบคทีเรียเป็นเจ้าบ้าน Cyanobacteria have interesting potential biotechnological applications. However, their applications are hampered by the low expression of heterologous genes. A possible way to improve the level of gene expression is to use an strong promoter. However, current knowledge of the structure and function of promoters recognized by cyanobacteria is still limited. To study the structure and function of cyanobacterial strong promoters, we characterized three of the isolated strong promoter-active fragments of Synechococcus PCC7942, designated E3, E10 and E14D2. The E3 promoter-active fragment harbored the tRNApro gene upstream of the promoterless GUS gene. The promoter of tRNApro gene located upstream of its coding sequence. Differentiation of the 5’ end of tRNApro-GUS transcripts of pKG-E3 revealed that the true transcription initiation sites were located at upstream of the tRNApro coding sequence, while the processed sites were located downstream. The regions of the tRNApro gene that affect the expression of the GUS activity were characterized. The E10 promoter-active fragment was regulated by light intensity. The regions harboring basal promoter activity, positive regulator and light-intensity response were identified. The E10 promoter-active fragment responded to high light intensity at transcriptional level and probably regulated the ORF76 gene in Synechococcus chromosome. The E14D2 promoter-active fragment contained distance enhancer. The transcription initiation sites of E14D2-GUS were determined. The region harboring nt.-226 to nt – 630, which was required for strong promoter activity, contained the putative LysR transcription activator binding site. Electrophoresis mobility shift assay revealed that this region also contained the DNA-protein binding site. We can use the strong promoters from this study to express high value proteins in cyanobacteria. |
| บรรณานุกรม | : |
วิภา จึงจตุพรชัย . (2546). การควบคุมการทำงานและลำดับเบสของโปรโมเตอร์แข็งขันของไซยาโนแบคทีเรีย Synechococcus PCC7942.
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย. วิภา จึงจตุพรชัย . 2546. "การควบคุมการทำงานและลำดับเบสของโปรโมเตอร์แข็งขันของไซยาโนแบคทีเรีย Synechococcus PCC7942".
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย. วิภา จึงจตุพรชัย . "การควบคุมการทำงานและลำดับเบสของโปรโมเตอร์แข็งขันของไซยาโนแบคทีเรีย Synechococcus PCC7942."
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2546. Print. วิภา จึงจตุพรชัย . การควบคุมการทำงานและลำดับเบสของโปรโมเตอร์แข็งขันของไซยาโนแบคทีเรีย Synechococcus PCC7942. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2546.
|
