จากงานวิจัยที่ผ่านมาพบว่าภาวะความเครียดที่เกิดใน สัตว์ทดลอง และในคน มีผลต่อการเปลี่ยนแปลงปริมาณโปรตีน ของ Mitochondrial Benzodiazepine Receptor (MBR) ในเนื้อเยื่อที่จำเพาะโดยพบว่าภาวะความเครียดแบบเฉียบพลัน มีความสัมพันธ์กับการเพิ่มขึ้นของโปรตีน MBR ในขณะที่ภาวะ ความเครียดแบบเรื้อรังระดับโปรตีน MBR จะลดลง การศึกษา วิจัยในครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อทดสอบว่าการเปลี่ยนแปลงระดับ ของโปรตีน MBR นี้ เป็นผลจากการเปลี่ยนแปลงในการทำงาน ของยีน MBR หรือไม่ โดยวัดการเปลี่ยนแปลงของ MBR mRNA ในเนื้อเยื่อของหนูที่ถูกทำให้อยู่ในภาวะความเครียดด้วยเทคนิค One tube non-radioactive RT-PCR โดยผลิตผลของยีน MBR ที่ถูกสังเคราะห์โดยวิธีดังกล่าวนี้จะนำเอานิวคลีโอไทด์ dUTP ที่ติดฉลากด้วยฟลูออเรสซีสมาสร้างเป็นสายใหม่ของยีน ซึ่งสามารถตรวจจับได้ด้วยแอนติบอดีต่อฟลูออเรสซีนที่ยึดติดกับ เอนไซม์ horseradish peroxidase โดยเอนไซม์จะทำ ปฏิกิริยากับสารตั้งต้นคือ luminol และ peroxide ซึ่งจะให้ ผลเป็นแสงที่ตรวจพบได้บนฟิล์มเอ็กซเรย์ ปริมาณของยีน MBR จะแสดงในรูปของอัตราส่วนระหว่าง MBR mRNA ต่อ Glyceraldehdy 3 phosphate dehydrogenase (GAPDH) mRNA หรือ actin mRNA ซึ่งถูกร่วมสังเคราะห์ในปฏิกิริยาเดียวกัน การสังเคราะห์ยีน MBR โดยเทคนิค RT-PCR นี้ ปริมาณของผลิตผลที่ได้มีความสัมพันธ์ เป็นเส้นตรงกับจำนวนรอบของการสังเคราะห์ และปริมาณตั้งต้น ของ RNA ดังนั้นเทคนิค RT-PCR นี้จึงถูกนำไปใช้ในการวัดความ เปลี่ยนแปลงของปริมาณ MBR mRNA ระหว่างตัวอย่างที่ต้องการ ทดสอบ แต่อย่างไรก็ตาม เราพบว่าความไวในการตรวจวัดความ เปลี่ยนแปลงของ MBR mRNA ด้วยวิธีดังกล่าวนี้มีข้อจำกัดคือ สามารถตรวจวัดความแตกต่างของระดับ MBR mRNA ระหว่าง ตัวอย่างทดสอบที่มีความแตกต่างมากกว่าประมาณ 50% ในการศึกษาภาวะความเครียดในการทดลองนี้ได้ใช้แบบ จำลองความเครียด 3 ชนิด คือ 1) บังคับให้หนูว่ายในน้ำที่มี อุณหภูมิ 18 องศาเซลเซียส 2) บังคับให้หนูอยู่ในขวดพลาสติก รูปทรงกระบอก 3) ฉีดยา dexamethasone ให้หนูเป็นเวลา 7 วัน จากผลการทดลองของภาวะความเครียดแบบเฉียบพลัน โดยการบังคับให้หนูว่ายน้ำเป็นเวลา 15 นาที และการบังคับ ให้หนูอยู่ในขวดพลาสติกรูปทรงกระบอกเป็นเวลา 45 นาทีพบว่า การแสดงออกของยีน MBR ไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ ในทุกอวัยวะที่ทำการทดสอบ เช่น ต่อมหมวกไต, ไต, อัณฑะ และ olfactory bulb เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม ส่วน ผลการทดลองในภาวะความเครียดแบบเรื้อรังโดยการบังคับให้ หนูอยู่ในขวดพลาสติกรูปทรงกระบอกเป็นเวลา 7 วัน ๆ ละ 2 ครั้ง ๆ ละ 45 นาที ไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ ของการแสดงออกของยีน MBR ในอวัยวะดังกล่าว ในขณะที่ แบบจำลองความเครียดแบบเรื้อรังโดยฉีดยา dexamethasone (4 mg/kg B.W.) ให้หนูเป็นเวลา 7 วัน กลับพบว่าระดับของ MBR mRNA ในต่อมหมวกไตลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม โดยที่ในใต และอัณฑะ ไม่พบ ความเปลี่ยนแปลงดังกล่าว จากผลการทดลองภาวะความเครียดอาจจะกระตุ้นการ เปลี่ยนแปลงของระดับ MBR mRNA เล็กน้อยซึ่งไม่สามารถ ตรวจพบได้ด้วยเทคนิค RT-PCR นี้ หรือการเปลี่ยนแปลงของ ระดับโปรตีน MBR จากงานวิจัยที่ผ่านมา อาจจะเกิดจากกลไก อื่นที่นอกเหนือจากการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของยีน แต่อย่างไรก็ตามในแบบจำลองภาวะความเครียดแบบเรื้อรัง โดยฉีดยา dexamethasone ให้หนูเป็นเวลา 7 วัน และ จากผลการทดลองหาระดับของ MBR mRNA ในอวัยวะต่างๆ ซึ่งให้ผลที่สอดคล้องกับระดับการกระจายตัวของโปรตีน MBR บ่งชี้ว่าการเปลี่ยนแปลงของโปรตีน MBR อาจเกิดจากการ เปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของยีน