วัตถุประสงค์หลักของโครงการวิจัยนี้เพื่อศึกษาการแยกแอลคาไลน์โพรทีเอสโดยตรงจากน้ำหนัก จากเชื้อ ~iBacillus Subtilis~i TISTR 25 โดยใช้ระบบสารละลายน้ำสองวัฏภาคของ PEG 1000 และโพแทสเซียมฟอสเฟต โดยแบ่งงานวิจัยนี้ออกเป็นสามส่วนใหญ่ๆคือ ส่วนที่หนึ่งเป็นการศึกษาอิทธิพลของค่าความเป็นกรด-ด่างของระบบ (7.5 8.5 9.5 และ10.5) สัดส่วนเชิงปริมาตรของวัฏภาคบนต่อวัฏภาคล่าง (22:1 3:1 1:1 1:3 1:25) และความเข้มข้นของปริมาณน้ำหนัก (10 20 30 40 และ 50 เปอร์เซนต์โดยน้ำหนักของระบบ) ที่มีผลต่อค่าสัมประสิทธิ์การแยก ค่ากิจกรรมจำเพาะของแอลคาไลน์โพรทีเอส และเปอร์เซนต์ผลได้พบว่าภาวะที่เหมาะสมต่อการสกัดแอลคาไลน์โพรทีเอส คือ ที่ค่าความเป็นกรด-ด่างเท่ากับ7.5 สัดส่วนเชิงปริมาตรของวัฏภาคบนต่อวัฏภาคล่างเท่ากับ 1:25 และความเข้มข้นของน้ำหมักเท่ากับ 50 เปอร์เซนต์โดยน้ำหนักของระบบ ให้ประสิทธิภาพการสกัด ค่ากิจกรรมจำเพาะและเปอร์เซนต์ผลได้ ซึ่งมีค่าเท่ากับ 48.3 และ 17.7 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีนและ 62.2เปอร์เซนต์ ตามลำดับ ส่วนที่สองคือการเลือกชนิดและออกแบบหอสกัด โดยใช้ปริมาตรไหลผ่าน จำนวนขั้นตอนสมดุล คุณสมบัติทางกายภาพ สัดส่วนของอัตราไหลเชิงปริมาตรของวัฏภาค ปริมาณของแข็งในระบบ ความง่ายในการทำความสะอาด และสามารถดูแลรักษาและซ่อมบำรุงได้ง่าย พบว่าหอสกัดแบบ Oldshue Rushton เป็นหอสกัดที่เหมาะสมที่สุด โดยออกแบบให้มีความสูง 500 มิลลิเมตรเส้นผ่านศูนย์กลาง 46 มิลลิเมตร เส้นผ่านศูนย์กลางของใบพัด 18 มิลลิเมตร เส้นผ่านศูนย์กลางภายในของวงแหวน 23 มิลลิเมตร และระยะห่างระหว่างวงแหวน 23 มิลลิเมตร ส่วนที่สามซึ่งเป็นส่วนสุดท้ายของงานวิจัยนี้ คือ ศึกษาอิทธิพลของความเร็วรอบในการปั่นกวนของใบพัด (0 50 100 150 และ 200 รอบต่อนาที) อัตราไหลเชิงปริมาตรของวัฏภาคกระจายตัว (1.0 2.1 3.4 และ 5.3 มิลลิลิตรต่อนาที) และอัตราไหลเชิงปริมาตรของวัฏภาคต่อเนื่อง (17.9 และ 11.8 มิลลิลิตรต่อนาที) และความเข้มข้นของน้ำหมักเริ่มต้นที่เติมในวัฏภาคต่อเนื่อง (20 40 60 และ 72 เปอร์เซนต์โดยน้ำหนัก) ที่มีผลต่อจำนวนเท่าความบริสุทธิ์ เปอร์เซนต์ผลได้ และประสิทธิภาพการสกัด โดยทำการสกัดแบบต่อเนื่องในหอสกัดโดยให้วัฏภาคกระจายตัวซึ่งมีองค์ประกอบของ PEG 1000 เท่ากับ 42.5% (w/w) และโพแทสเซียมฟอสฟอต เท่ากับ 2.5% (w/w) น้ำ 55.0% (w/w) ไหลขึ้นสวนทางกับวัฏภาคต่อเนื่องที่ไหลลง ซึ่งมีองค์ประกอบของโพแทสเซียมฟอสเฟส เท่ากับ 28.0% (w/w) และน้ำ(หรือน้ำหมัก) 72.0% (w/w) ซึ่งพบว่าที่ภาวะที่เหมาะสมต่อการสกัดแอลคาไลน์โพรทีเอสในหอสกัดแบบ Oldshue Rushton คือ ที่ความเร็วรอบในการปั่นกวนเท่ากับ 100 รอบต่อนาทีอัตราไหลเชิงปริมาตรของวัฏภาคกระจายตัวและวัฏภาคต่อเนื่อง เท่ากับ 3.4 และ 11.8มิลลิลิตรต่อนาที ตามลำดับ และมีความเข้มข้นของน้ำหมักเริ่มต้นเท่ากับ 20 เปอร์เซนต์โดยน้ำหนักของวัฏภาคต่อเนื่อง ซึ่งให้จำนวนเท่าความบริสุทธิ์ เปอร์เซนต์ผลได้ และประสิทธิภาพการสกัด เท่ากับ 6.0 73.7 เปอร์เซนต์ และ 0.79 ตามลำดับ และพบว่าแอลคาไลน์โพรทีเอสที่ผ่านการสกัดแล้วซึ่งอยู่ในวัฏภาคกระจายตัว มีกิจกรรมลดลง 12.99.2 6.2 เปอร์เซนต์ เมื่อเก็บไว้เป็นเวลา 1 เดือน ที่ 32(+,ฑ)2 4 -20 องศาเซลเซียสตามลำดับ และภาวะที่เหมาะสมจากการสกัดแอลคาไลน์โพรทีเอสในหอสกัดแบบ Oldshue Rushtonในงานวิจัยนี้สามารถนำไปคำนวณหาค่าอุทกพลศาสตร์ของของเหลวและข้อมูลการถ่ายเทมวล เพื่อใช้ในการออกแบบและขยายขนาดหอสกัดต่อไป