ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การศึกษาการควบคุมการแสดงออกของยีนไพรูเวทคาร์บอกซิเลซในเซลล์ตับ

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การศึกษาการควบคุมการแสดงออกของยีนไพรูเวทคาร์บอกซิเลซในเซลล์ตับ
นักวิจัย : ศราวุฒิ จิตรภักดี
คำค้น : cAMP , CRE , gluconeogenesis , hepatocyte , HNF4 , Promoter , Pyruvate carboxylase , Sp1 , Sp3 , transcription regulation
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2554
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=RMU5080023 , http://research.trf.or.th/node/5337
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ชิ้นส่วนขนาดต่างๆ กันของ P1 โปรโมเตอร์ของยีน pyruvate carboxylase (PC) ถูกเชื่อมต่อกับยีนluciferase ในพลาสมิด pGL3-basic จากนั้นถ่ายโอนยีนเข้าสู่เซลล์ตับ AML12 HepG2 และ NIH3T3 จากการทดลองพบว่านิวคลีโอไทด์ที่ตำแหน่ง -166 ถึง -80 ของ P1 โปรโมเตอร์ เป็นตำแหน่งหลักในการควบคุมกระบวนการถอดรหัสพันธุกรรมขั้นพื้นฐาน โดยพบว่าบริเวณดังกล่าวประกอบไปด้วย GC box 3 ตัวอยู่ที่ตำแหน่ง-172/-148 (GC1), -136/-127 (GC2) และ -91/-79 (GC3) ตามลำดับ จากการวิเคราะห์ด้วยวิธี EMSA และ ChIP assay พบว่า transcription facto Sp1 และ Sp3 จับกับ GC box ทั้ง 3 ตัว overexpression ของ Sp1 และ Sp3 ส่งผลให้ P1 promoter มีระดับการทำงานที่สูงขึ้นโดย Sp1 มีผลกระตุ้นมากกว่า Sp3 นอกจากนี้ยังพบว่า mutation ของ GC box ตัวใดตัวหนึ่งส่งผลให้โปรโมเตอร์ P1 สูญเสียความสามารถในการการถอดรหัสพันธุกรรมขั้นพื้นฐานลดลงกว่า 70-80% อย่างไรก็ตามพบว่าระดับการทำงานของโปรโมเตอร์ที่มี GC1 หรือ GC2 สูญเสียไปนั้นสามารถถูกแก้ไขโดยการ overexpress Sp1 และSp3 เข้าไปในเซลล์ขณะที่โปรโมเตอร์ที่สูญเสีย GC3 นั้น Sp1 และ Sp3 ไม่สามารถแก้ไขความบกพร่องนี้ได้แสดงให้เห็นว่า GC3 มีบทบาทสำคัญต่อการชักนำด้วย Sp1 และ Sp3 นอกจากนี้ยังพบลำดับนิวคลีโอไทด์ที่เป็นที่จับของ liver enrich transcription factor HNF4α ที่ตำแหน่ง -386/-374 โดยเมื่อ co-transfect P1 promoter ด้วย HNF4α expression plasmid ในเซลล์ตับและในเซลล์ที่ไม่ใช่เซลล์ตับด้วยวิธี EMSA และ ChIP ในเซลล์ที่แยกจากตับหนู mouse และ AML12 cell line พบว่า HNF4α สามารถจับกับนิวคลีโอไทด์ตำแหน่งนี้ได้ดีมาก ผลการศึกษาผลกระทบของฮอร์โมน cAMP ต่อการแสดงออกของยีน pyruvate carboxylase ในเซลล์ตับ HepG2 พบว่า cAMP ส่งผลให้ให้ระดับ PC mRNA เพิ่มสูงขึ้น 2-3 เท่าภายในเวลา 48 ชม และเพิ่มสูงขึ้นสูงสุด 4 เท่าที่เวลา 72 ชม ยับพบว่าฮอร์โมน dexamethasone (dex) ร่วมกับ cAMP เพิ่มระดับ PC mRNA ให้สูงขึ้นไปจากเดิมอีก 2 เท่า ขณะที่ dex หรือ insulin ไม่มีผลต่อการเพิ่มระดับ PC mRNA กลไกการเพิ่มระดับ PC mRNA โดย cAMP ออกฤทธิ์ผ่าน cAMP-responsive element (CRE) ที่อยู่ที่ตำแหน่ง –1355/-1350 บนโปรโมเตอร์ P1 จากการวิเคราะห์ด้วยวิธี EMSA และ ChIP พบว่า โปรตีน cAMP-responsive element binding protein (CREB) ซึ่งเป็นโปรตีนที่ตอบสนองต่อการเพิ่มระดับ cAMP ในเซลล์จับกับ CRE ส่งผลกระตุ้นให้มีการแสดงออกของ PC mRNA นอกจากนี้ยับพบว่า overexpression ของ CREB ส่งผลให้ระดับการทำงานของโปรโมเตอร์ P1 ถูกกระตุ้นสูงขึ้นด้วย

บรรณานุกรม :
ศราวุฒิ จิตรภักดี . (2554). การศึกษาการควบคุมการแสดงออกของยีนไพรูเวทคาร์บอกซิเลซในเซลล์ตับ.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
ศราวุฒิ จิตรภักดี . 2554. "การศึกษาการควบคุมการแสดงออกของยีนไพรูเวทคาร์บอกซิเลซในเซลล์ตับ".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
ศราวุฒิ จิตรภักดี . "การศึกษาการควบคุมการแสดงออกของยีนไพรูเวทคาร์บอกซิเลซในเซลล์ตับ."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2554. Print.
ศราวุฒิ จิตรภักดี . การศึกษาการควบคุมการแสดงออกของยีนไพรูเวทคาร์บอกซิเลซในเซลล์ตับ. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2554.