เอโซรีดักเทสเป็นเอนไซม์ที่สามารถย่อยสลายสีเอโซโดยการรีดิวซ์ที่หมู่เอโซ จากการศึกษาก่อน หน้านี้พบว่าการควบคุมการแสดงออกของยีน azoR1 ของแบคทีเรียที่อาศัยในดิน Bacillus subtilis เป็นการควบคุมแบบลบโดยตัวยับยั้ง YodB ระดับของยีน azoR1 และปริมาณโปรตีน AzoR1 เพิ่มขึ้นในสายพันธุ์ที่มีการกลายพันธุ์ของยีน yodB ในการศึกษาครั้งนี้จึงศึกษายีน azoR1 ที่สังเคราะห์โปรตีนชนิด FMN-dependent NADH-azoreductase โดยเพิ่มการแสดงออกของยีนใน Escherichia coli โปรตีน AzoR1 สกัดได้จากพลาสมิดลูกผสมที่ใช้ดีเอ็นเอพาหะที่มีHis tag ตรง บริเวณปลายอะมิโน (pET-16b) เอนไซม์ที่ได้สามารถทำงานได้ในสภาวะที่มีอากาศ เมื่อวิเคราะห์ โดยเทคนิค gel filtration พบว่าน้ำหนักโมเลกุลของ AzoR1 มีขนาด 49 กิโลดาลตัน และมี FMN เป็นโคเฟคเตอร์ การวิเคราะห์ชนิดของโคเอนไซม์สำหรับแอคติวิตีของ AzoR1 พบว่าเมื่อใส่ NADH เป็นตัวให้อิเล็กตรอนในการรีดิวซ์สีเมทิลเรด เอนไซม์แอคติวิตีเพิ่มขึ้น 14 เท่า เปรียบเทียบกับการ ใส่ NADPH ค่า Km มีค่าเท่ากับ 0.018 mM สำหรับ NADH และ 0.267 mM สำหรับเมทิลเรด ส่วน ค่า Vmax มีค่า 7.74 และ 44.44 U/mg protein สำหรับ NADH และ เมทิลเรด ตามลำดับ ซึ่งแอคติวิตี ของเอนไซม์ต้องอาศัย NADH AzoR1 ยังสามารถรีดิวซ์สีคองโกเรด ด้วยค่าแอคติวิตีเท่ากับ 0.13±0.006 เอนไซม์ไม่สามารถย่อยสลาย Orange G และ Orange II Azoreductases have been characterized as enzymes that can decolorize azo dyes by reducing azo groups. Our previous study uncovered the regulation of azoR1 expression in soil bacterium, Bacillus subtilis. The azoR1 expression was negatively controlled by YodB repressor. The level of azoR1 transcription and AzoR1 protein were increased in yodB mutant. In this study, the gene encoding FMN-dependent NADH-azoreductase (azoR1) was identified and overexpressed in Escherichia coli. The purified AzoR1 from recombinant plasmid using the N-terminal His tag vector (pET-16b) as overexpression vector was oxygen insensitive. The molecular mass of the native form of AzoR1 was determined to be a homodimer of 49 kDa by gel filtration and bore FMN as a flavin cofactor. Analysis of coenzyme requirement for AzoR1 activity showed that NADH promoted 14 times higher than NADPH as electron donor to reduce Methyl red (MR). The Km values for both NADH and MR substrates were 0.018 and 0.267 mM, respectively. The Vmax for NADH and MR were 7.74 and 44.44 U/mg protein, respectively. This activity was NADH dependent. The AzoR1 was also able to reduce Congo Red with specific activity of 0.13±0.006 U/mg protein. The enzyme was not able to decolorize Orange G and Orange II.