เกี่ยวกับความไวในการตรวจพิสูจน์เชื้อแบคทีเรียที่เป็นสาเหตุของโรคหูชั้นกลางอักเสบที่อาศัยการเพาะเลี้ยงเชื้อแบบดั้งเดิม (Conventional culture method) โดยเฉพาะในกรณีที่มี underlying otitis media with effusion ดังนั้นในการศึกษานี้จึงได้เลือกเทคนิค multiplex PCR ขึ้นมาเพื่อใช้ตรวจหาเชื้อแบคทีเรียที่เป็นสาเหตุของโรคหูชั้นกลางอักเสบ 3 สปีชีส์คือ Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, และ Maraxella catarinalis พร้อมกันในขั้นตอนเดียวเนื่องจากเทคนิคดังกล่าวมีความไวความจำเพาะและมีความถูกต้องแม่นยำสูงทั้งยังเป็นการประหยัดเวลาสารเคมีและน้ำยาเนื่องจากเป็นการทำเพียง reaction เดียวพร้อมกันการศึกษาครั้งนี้ได้คัดเลือก prmers frdB-F / frdB R. lytA-F / lyA-R, and CopB-F / CopB-R Hanna inimeneudanustanungaheula fumarate reductase ใน H. influenzae, ยืนที่สร้างสารพิษ autolysin ใน S. pneumoniae และยืนที่สร้าง outer membrane protein B ใน M. catarhalis นอกจากนี้ยังมี primer H1-1 / H1-2 โดยมีจุดประสงค์เพื่อใช้ตรวจแยกความแตกต่างระหว่าง H. influenzae สายพันธุ์ที่สร้างแคปซูลและไม่สร้างแคปซูลและการเพิ่ม primer RW-O / DG74 ซึ่งจำเพาะกับ bacterial 16S ribosomal RNA เพื่อเป็น internal control ทำให้สามารถตรวจสอบความถูกต้องในการทำ multiplex PCR แต่ละครั้งได้โดยใช้ primers ทั้ง 5 คู่ดังกล่าว Multiplex PCR ที่พัฒนาขึ้นนี้สามารถตรวจแยกเชื้อ H. infuenza S. pneumoniae, และ M. celethais สายพันธุ์มาตรฐานได้อย่างถูกต้องแม่นยำทั้งยังสามารถตรวจแยก H. fluenzee สายพันธุ์ที่สร้างแคปซูลและไม่สร้างแคปซูลออกจากกันได้อย่างถูกต้องเทคนิคที่พัฒนาขึ้นนี้มีความจำเพาะสูงโดยสามารถตรวยแยกเชื้อ H. influenzae S. pneumoniae, uaz M. Catarrhalis non nistouunniðurioltou vinuthiaelu บริเวณทางเดินหายใจของคนได้ multiplex PCR ที่พัฒนาขึ้นนี้มีความไวสูงโดยสามารถตรวจหาเชื้อแบคทีเรียก่อโรคในระดับต่ำสุดที่ 19 และเมื่อนำมาทดสอบกับตัวอย่างดีเอ็นเอของ clinical isolate ได้จากผู้ป่วยจาก 2 โรงพยาบาลในเขตภาคเหนือตอนล่างพบว่าให้ผลการตรวจที่ถูกต้องทุกไอโซเลทเทคนิค multiplex PCR ที่พัฒนาขึ้นนี้มีความจำเพาะและความไวสูงซึ่งนับว่าเป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าสำหรับการตรวจวินิจฉัยเชื้อแบคทีเรียที่เป็นสาเหตุสำคัญของโรคหูชั้นกลางอักเลยทั้ง 3 สปีชีส์ที่แยก