ไวรัส H5N1 มีการเปลี่ยนแปลงของ amino acid จาก glutamic acid (E) ไปเป็น lysine (K) ที่ตําแหน่ง 627 ของโปรตีน PB2 การเปลี่ยนแปลงที่พบนี้นอกจากจะเป็นตัวบ่งชี้ถึงการดัดแปลงสายพันธุ์ของ ไวรัสเพื่อให้เหมาะสมต่อการอยู่ใน mammalian host แล้วยังเป็นสาเหตุสําคัญเกี่ยวข้องกับความรุนแรงของเชื้อไวรัสในหนู mice อีกด้วย ในปัจจุบันกลไกการเกิดพยาธิสภาพเนื่องจากการติดเชื้อไวรัส H5N1 ในคนยังไม่มีความชัดเจน เร็วๆนี้จากการผ่าศพของคนซึ่งเสียชีวิตจากการติดเชื้อไวรัส H5N1 PB2 627E พบว่าในตับไม่มีการเกิดพยาธิสภาพและไม่มีการสร้างโปรตีนของเชื้อเกิดขึ้น ซึ่งต่างจากการผ่าศพของคนซึ่งเสียชีวิตจากการติดเชื้อไวรัส H5N1 PB2 627K ซึ่งมีการตรวจพบว่ามีการเกิดพยาธิสภาพและการสร้างโปรตีนของเชื้อในตับ จากการตรวจพบนี้แสดงให้เห็นว่าการติดเชื้อไวรัส H5N1 ในตับของคนสามารถชี้บ่งถึงความรุนแรงของเชื้อได้ ด้วยสาเหตุดังกล่าวนี้ทําให้ผู้วิจัยสนใจที่จะใช้เซลล์ HC-40 ซึ่งเป็น cell line ตับของคนซึ่งมีคุณสมบัติใกล้เคียงกับ primary cell ของเซลล์ตับมาทําการศึกษาวิจัยหาความสัมพันธ์ของการเปลี่ยนแปลงของ amino acid ของโปรตีน PB2 627 จาก E เป็น K กับความไวต่อการติดเชื้อและกลไกการเกิดพยาธิสภาพของเซลล์ตับ ผลการทดลองที่ได้พบว่าไวรัส H5N1 PB2 627K มีความสามารถในการ infect เซลล์คือ HC-04, HepG2 และ MDCK ได้ดีกว่า H5N1 PB2 627E แต่อย่างไรก็ตามพบว่าความสามารถในการ replicate ใน host cell ของ H5N1 PB2 627K มีน้อยกว่า H5N1 PB2 627E ชึ่งเป็นไปได้ว่า H5N1 PB2 627K มีผลในการทำให้ host cell เกิดการ lysis ก่อนที่จะมีการผลิด viral progeny เพื่อเป็นการพิสูจน์ความคิดนี้และเพื่อให้แน่ใจว่าผลการทดลองที่ได้เกิดจาก ความแตกต่างที่ PB2 627 จาก E เป็น K เท่านั้น จึงได้ทำการสร้าง reassortant viruses โดยการทำ reverse genetic ของ H5N1 627E เพื่อนำมาทำการทดลอง mutagenesis เพื่อเปลี่ยนจาก E เป็น K และทดสอบดูผลของการเปลี่ยนแปลงกับ host cell