EST-derived SSR หรือ eSSR ปรากฎภายในลำดับนิวคลีโอไทด์ชนิด expressed sequenced tags (ESTs) งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อระบุ วิเคราะห์และพัฒนาเครื่องหมาย eSSR ของถั่วลิสง การวิเคราะห์ ESTs จำนวน 1345 ชิ้นจากห้องสมุด cDNA ของถั่วลิสง 2 สายพันธุ์คือ C34-24 และ A13 เริ่มต้นจากการประเมินคุณภาพของลำดับนิวคลีโอไทด์ ซึ่ง 1240 ชิ้นของ ESTs คิดเป็น 92.20% ผ่านเกณฑ์คุณภาพ การจัดคลัสเตอร์ของ ESTs ของแต่ละห้องสมุด cDNA เพื่อลดความซ้ำซ้อนของลำดับนิวคลีโอไทด์ ด้วยเกณฑ์ตัดสินที่ค่า E เท่ากับหรือมากกว่า 1 x 10-200 ได้ผลห้องสมุด cDNA ของ C34-24 มี 356 คลัสเตอร์และห้องสมุด cDNA ของ A13 มี 632 คลัสเตอร์ ตามด้วยการค้นหา eSSR ภายในคลัสเตอร์ของ ESTs ด้วยซอฟท์แวร์ SSRIT ผลการค้นหาพบว่าการกระจายตัวของ eSSR ในห้องสมุด cDNA ทั้งสองมีแบบแผนคล้ายคลึงกัน ระยะห่างระหว่าง eSSR ประมาณ 4 กิโลเบส การวิเคราะห์ความถี่ทำให้ทราบว่า ชนิดของ eSSR ที่มีจำนวนมากคือ trimer และ AAT/ATT และ ATC/GAT เป็น motif ที่มีสัดส่วนสูง เมื่อระบุตำแหน่ง eSSR เรียบร้อยแล้ว ได้ใช้ซอฟท์แวร์ Primer 3 ออกแบบไพรเมอร์สำหรับพีซีอาร์จากลำดับนิวคลีโอไทด์ประกบด้านข้าง eSSR ไพรเมอร์จำนวน 46 คู่ใช้ในปฏิกิริยาพีซีอาร์ของดีเอ็นเอจากถั่วลิสง 17 พันธุ์คือ PI 109839, Khonkaen 60-3, PI 262064, Khonkaen 4, NCAc 17090, Tainan 9, PI 155246, ICGV 98324, ICG 11109, ICG 13099, A 13, IC 34, ICGV 98353, ICGV 98305, ICGV 98330, Khonkaen 6, และ Kalasin 2 พบว่าปรากฏจำนวนแอลลีลทั้งหมด 183 แอลลีล เฉลี่ย 3.96 แอลลีลต่อโลคัส ค่า polymorphic information content อยู่ระหว่าง 0 ถึง 0.92 ให้ค่าเฉลี่ย 0.75 เมื่อตรวจสอบความจำเพาะของเครื่องหมาย eSSR ที่เพิ่มปริมาณจากตัวอย่างดีเอ็นเอของพันธุ์ A13 ด้วยการโคลนและอ่านลำดับเบสทั้งสองสาย ลำดับนิวคลีโอไทด์ของโคลน eSSR 1-3 ได้รับการวิเคราะห์และส่งเข้าสู่ฐานข้อมูล Genbank ในส่วนที่จัดไว้สำหรับ STS (sequence tag site) และได้รับหมายเลขประจำตัว BV725430-BV725432 โคลน eSSR 1 (BV725430) และ eSSR 3 (BV725432) มีความเหมือนกันกับลำดับเบส EST ที่ใช้เป็นต้นแบบของการออกแบบไพรเมอร์คือ CD037506 และ CD037564 สำหรับโคลน eSSR 2 (BV725431) เมื่อเปรียบเทียบกับลำดับ CD037532 ที่ใช้เป็นต้นแบบของการออกแบบไพรเมอร์แล้วพบว่าเกิดการแทนที่เบสชนิด transition ใกล้บริเวณไพรเมอร์ จากเบส A ในถั่วลิสงพันธุ์ C34-24 เป็นเบส G ในถั่วลิสงพันธุ์ A13 จัดเป็น single nucleotide polymorphism (SNP) เครื่องหมาย eSSRs ที่แสดงพอลิมอร์ฟิกรวมทั้งเครื่องหมายดีเอ็นเอชนิด SNP ที่ค้นพบขึ้นใหม่ จากงานวิจัยครั้งนี้เป็นแหล่งสำคัญของเครื่องหมายดีเอ็นเอที่แสดงพอลิมอร์ ฟิกสูงในถั่วลิสง