ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร

หน่วยงาน สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร
นักวิจัย : พนิดา ชัยเนตร , Panida Jayanetra
คำค้น : 36 05 0111 , Biochemistry , Biological sciences , Biology and biochemistry , Enterobacteriaceae , Polymerase chain reaction , Salmonella , Typhoid fever , ดีเอ็นเอโพรบ , ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส , ศูนย์พันธุวิศวกรรมและเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ , สาขาวิศวกรรมศาสตร์และอุตสาหกรรมวิจัย , เอ็นเตอริกแบคทีเรีย
หน่วยงาน : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2539
อ้างอิง : http://www.nstda.or.th/thairesearch/node/1900
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ได้พัฒนาดีเอ็นเอโพรบและวิธี Polymerase chain reaction (PCR) เพื่อใช้ตรวจหา E.coli และ Salmomella โดยได้คัดเลือกดีเอ็นเอโพรบสำหรับตรวจหา Salmonella spp. จากทรานฟอร์มแมนท์ของยีน pdu ที่โตบนอาหารเลี้ยงเชื้อ Rambach agar ซึ่งมีแอมพิซิลิน และพบว่าโพรบ 3 ชนิดคือ PDU-XK2, PDU-C3.2 และ PDU-C1.8 เมื่อติดฉลากด้วย digoxigenin จะให้ความเฉพาะเจาะจงในการตรวจหา Salmonella ได้ กล่าวคือจะสามารถตรวจพบ Salmonella ทั้ง 83 serotypes ที่ไช้ในการทดสอบได้ โดยให้ผลบวกข้ามกับเชื้อ enteric หรือ gram positive bacteria อื่น ๆ ทั้ง 25 สายพันธุ์ ที่ใช้ทดสอบไม่สามารถตรวจพบเชื้อ Salmonella ได้หากมีเชื้ออยู่ 105 CFU/dot ได้ทำการหาลำดับ DNA sequence ของ Probe PDU-XK2 ซึ่งพบว่า fragment นี้อาจสร้างโปรตีนขนาด 14 หรือ 15 kDa. ซึ่งยังไม่ทราบหน้าที่ Primers ที่สร้างจาก sequence ของ PDU-XK2 นำมาสร้างเป็น Primers สำหรับตรวจหา Salmonella พบว่าหากใช้เทคนิค PCR จะสามารถตรวจพบ Salmonella ได้เมื่อตัวอย่างนี้มี เชื้อเพียง 1-10 cells สำหรับการตรวจหา E.coli ได้ใช้ดีเอ็นเอโพรบจาก DNA fragment ขนาด 153 และ 527 bp ซึ่งเป็น PCR products ที่ ได้จาก uidA หรือ gusA gene ของ E.coli K12 โดยที่ยีนนี้จะสร้างเอ็นไซม์ ?-glucuronidase หรือ GUS ซึ่งมีรายงานว่า 94-97% ของ E.coli สร้างเอ็นไซม์นี้ สำหรับเชื้อ E.coli ที่ไม่มี GUS activity มีรายงานว่าเกิดจาก point mutation ดังนั้นดีเอ็นเอโพรบที่ได้ยังคงสามารถตรวจพบยีน uidA ที่ไม่แสดงออกได้ พบว่าดีเอ็นเอโพรบทั้งสองสามารถ hybridize กับ E.coli 120 สายพันธุ์ และไม่ cross hybridize กับ enteric bacteria อื่น ๆ ยกเว้น Shigella 11 สายพันธุ์ที่ใช้ทดสอบซึ่งให้ผลบวกข้ามกับโพรบทั้งสอง การทำ dot blot hybridization ด้วยโพรบทั้งสองสามารถตรวจพบ E.coli ได้ 105 CFU/dot แต่จะสามารถตรวจพบ E.coli ได้หากมีเชื้อเพียง 1-10 cells ถ้าใช้เทคนิค PCR โดยใช้ primer GAL-301

บรรณานุกรม :
พนิดา ชัยเนตร , Panida Jayanetra . (2539). การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร.
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ.
พนิดา ชัยเนตร , Panida Jayanetra . 2539. "การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร".
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ.
พนิดา ชัยเนตร , Panida Jayanetra . "การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร."
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ, 2539. Print.
พนิดา ชัยเนตร , Panida Jayanetra . การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร. ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ; 2539.