| ชื่อเรื่อง | : | การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร |
| นักวิจัย | : | พนิดา ชัยเนตร , Panida Jayanetra |
| คำค้น | : | 36 05 0111 , Biochemistry , Biological sciences , Biology and biochemistry , Enterobacteriaceae , Polymerase chain reaction , Salmonella , Typhoid fever , ดีเอ็นเอโพรบ , ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส , ศูนย์พันธุวิศวกรรมและเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ , สาขาวิศวกรรมศาสตร์และอุตสาหกรรมวิจัย , เอ็นเตอริกแบคทีเรีย |
| หน่วยงาน | : | สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2539 |
| อ้างอิง | : | http://www.nstda.or.th/thairesearch/node/1900 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ได้พัฒนาดีเอ็นเอโพรบและวิธี Polymerase chain reaction (PCR) เพื่อใช้ตรวจหา E.coli และ Salmomella โดยได้คัดเลือกดีเอ็นเอโพรบสำหรับตรวจหา Salmonella spp. จากทรานฟอร์มแมนท์ของยีน pdu ที่โตบนอาหารเลี้ยงเชื้อ Rambach agar ซึ่งมีแอมพิซิลิน และพบว่าโพรบ 3 ชนิดคือ PDU-XK2, PDU-C3.2 และ PDU-C1.8 เมื่อติดฉลากด้วย digoxigenin จะให้ความเฉพาะเจาะจงในการตรวจหา Salmonella ได้ กล่าวคือจะสามารถตรวจพบ Salmonella ทั้ง 83 serotypes ที่ไช้ในการทดสอบได้ โดยให้ผลบวกข้ามกับเชื้อ enteric หรือ gram positive bacteria อื่น ๆ ทั้ง 25 สายพันธุ์ ที่ใช้ทดสอบไม่สามารถตรวจพบเชื้อ Salmonella ได้หากมีเชื้ออยู่ 105 CFU/dot ได้ทำการหาลำดับ DNA sequence ของ Probe PDU-XK2 ซึ่งพบว่า fragment นี้อาจสร้างโปรตีนขนาด 14 หรือ 15 kDa. ซึ่งยังไม่ทราบหน้าที่ Primers ที่สร้างจาก sequence ของ PDU-XK2 นำมาสร้างเป็น Primers สำหรับตรวจหา Salmonella พบว่าหากใช้เทคนิค PCR จะสามารถตรวจพบ Salmonella ได้เมื่อตัวอย่างนี้มี เชื้อเพียง 1-10 cells สำหรับการตรวจหา E.coli ได้ใช้ดีเอ็นเอโพรบจาก DNA fragment ขนาด 153 และ 527 bp ซึ่งเป็น PCR products ที่ ได้จาก uidA หรือ gusA gene ของ E.coli K12 โดยที่ยีนนี้จะสร้างเอ็นไซม์ ?-glucuronidase หรือ GUS ซึ่งมีรายงานว่า 94-97% ของ E.coli สร้างเอ็นไซม์นี้ สำหรับเชื้อ E.coli ที่ไม่มี GUS activity มีรายงานว่าเกิดจาก point mutation ดังนั้นดีเอ็นเอโพรบที่ได้ยังคงสามารถตรวจพบยีน uidA ที่ไม่แสดงออกได้ พบว่าดีเอ็นเอโพรบทั้งสองสามารถ hybridize กับ E.coli 120 สายพันธุ์ และไม่ cross hybridize กับ enteric bacteria อื่น ๆ ยกเว้น Shigella 11 สายพันธุ์ที่ใช้ทดสอบซึ่งให้ผลบวกข้ามกับโพรบทั้งสอง การทำ dot blot hybridization ด้วยโพรบทั้งสองสามารถตรวจพบ E.coli ได้ 105 CFU/dot แต่จะสามารถตรวจพบ E.coli ได้หากมีเชื้อเพียง 1-10 cells ถ้าใช้เทคนิค PCR โดยใช้ primer GAL-301 |
| บรรณานุกรม | : |
พนิดา ชัยเนตร , Panida Jayanetra . (2539). การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร.
ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ. พนิดา ชัยเนตร , Panida Jayanetra . 2539. "การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร".
ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ. พนิดา ชัยเนตร , Panida Jayanetra . "การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร."
ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ, 2539. Print. พนิดา ชัยเนตร , Panida Jayanetra . การพัฒนาดีเอ็นเอโพรบสำหรับการตรวจวินิจฉัยเอ็นเตอริกแบคทีเรียในอาหาร. ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ; 2539.
|
