วัตถุประสงค์ของโครงการวิจัยนี้เพื่อพัฒนาระบบการวิเคราะห์ฮอร์โมนโปรเจ สเตอร์โรน สำหรับวัดปริมาณฮอร์โมนในโคนม โดยการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อฮอร์โมนดังกล่าว ซึ่งทำได้โดยใช้หนูตัวเล็กสายพันธุ์ Balb/c เป็นแหล่งของเม็ดเลือดขาวที่ผลิตแอนติบอดีต่อ P-4 จากนั้นนำมาเชื่อม (Fusion) กับเซลล์ไมอีโลม่า (Myeloma) แล้วทำการคัดเลือกโคลน (Clone) ที่สามารถผลิตแอนติบอดีต่อฮอร์โมนนั้นๆซึ่งจะใช้สำหรับพัฒนาวิธีวิเคราะห์หา ระดับฮอร์โมนโปรเจสเตอร์โรนในพลาสม่าหรือน้ำนมของโคนมโดยวิธี ELISA ซึ่งจะมีการพัฒนาวิธีการวัดปริมาณฮอร์โมนในรูปของชุดตรวจสอบ เพื่อสนับสนุนการวิจัยของนักวิจัยในเครือข่ายวิจัย สรีรวิทยาโคนมและกลุ่มวิจัยอื่นของประเทศ และบริการให้กับกลุ่มเกษตรกรผู้เลี้ยงโคนม ทั่วประเทศ ซึ่งผลจากการพัฒนานี้จะนำไปสู่การวิเคราะห์ภาคสนามที่ให้ผลรวดเร็วโดยเฉพาะ กับโคนมของเกษตรกรในระดับฟาร์มดันี้: (1)วัดในวันผสมเทียม ต้องมีค่าต่ำเป็นการตรวจสอบว่าเกษตรกรได้ทำการตรวจการเป็นสัดของโคได้ถูก ต้องแล้วหรือไม่, (2)วัดในวันที่ 19 หลังผสม ถ้ามีค่าต่ำเป็นการเตือนว่าโคผสมไม่ติดและกำลังจะกลับสัดอีกครั้ง, (3)วัดในวันที่ 24 หลังผสม ถ้ามีค่าสูงแสดงว่าโคตั้งท้อง, (4) วัดสัปดาห์ละ 1 ครั้ง เพื่อจำแนกโคที่เป็นสัดเงียบ (Silent heat), (5)วัดหลังผสมได้ 16 วันทุกๆวันถ้ามีค่าต่ำติดต่อกัน 3 วันจะได้เริ่มตรวจสัดเพื่อเตรียมการผสมครั้งใหม่, (6)กรณีที่จะบังคับให้โคเป็นสัดพร้อมกัน (Synchronization of estrus) ด้วยฮอร์โมนโปรสตาแกลนดินเอฟ-2อัลฟ่า (Prostaglandin F2?, PGF2?) วัดโปรเจสเตอร์โรนก่อนว่ามีค่าสูงจึงจะทำได้. ทำการวิจัยจากห้องปฏิบัติการ 2 ที่ไปพร้อมๆกันคือ: (1) การทดลองที่ห้องปฏิบัติการกลาง ศูนย์พันธุวิศวกรรมและเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ และ (2) ห้องปฏิบัติการกลาง คณะเกษตรศาสตร์ มหาวิทยาลัยเชียงใหม่ การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดี ประกอบด้วยเซลล์ม้ามที่ได้จากหนู Balb/c ที่ถูกกระตุ้นการสร้างแอนติบอดีต่อ Progesterone-3-(O-Carboxy-methyl)Oxime:BSA เชื่อมกับ Myeloma cells ชนิด P3X63Ag8.653 ทำการตรวจการเกิดโคลนที่ผลิตแอนติบอดีต่อโปรเจสเตอร์โรนด้วยวิธี Plate trapped antigen ELISA ด้วย BSA_P4 และ BSA ผลการทดลองพบว่า พบไฮบริโดม่า โคลนจำนวน 587 โคลน ในจำนวนนี้มีไฮบริโดม่าที่สามารถผลิตแอนติบอดีต่อโปรเจสเตอร์โรนจำนวน 99 โคลน เมื่อเลือกโคลนที่มีการผลิตแอนติบอดีสูงสุดได้ 4 โคลนคือ โคลน 1C5, 3C2, 5H9, และ 4B2 ทั้งหมดเป็น Immunoglobulin ชนิด G1 โคลน 1C5, 3C2, และ 5H9 ผลิตแอนติบอดีที่มีค่าความไว (sensitivity) ในการวัดฮอร์โมนโปรเจสเตอร์โรนได้ที่ความเข้มข้น 2, 28, และ 14 นาโนกรัม ในขณะที่โคลน 4B2 มีค่าความไวที่ 13 พิโคกรัม แอนติบอดีทั้งหมดให้ค่า cross reactivity กับสะเตียรอยด์ชนิดอื่นในระดับที่ยอมรับได้ เมื่อใช้ในการวิเคราะห์การตั้งท้องของโคนม โดยสรุปโครงการวิจัยนี้สามารถผลิตโมโนโคนอลแอนติบอดีต่อโปรเจสเตอร์โร นสำหรับการพัฒนาชุดตรวจสอบสำเร็จรูปแบบ Immunochromatographic strip test เพื่อตรวจการตั้งท้องในระดับฟาร์มต่อไป