นการศึกษาบทบาทและความสำคัญของส่วน tandem repeats ในยีน leuA ซึ่ง กำหนดการสร้างเอนไซม์ alpha-isopropylmate synthase (α-IPMS) ของเชื้อ Mycobacterium tuberculosis ได้ทำการเปรียบเทียบคุณสมบัติเบื้องต้นของเอนไซม์ดังกล่าว ที่เตรียมจากยีน leuA ปกติ และที่เตรียมจากยีน leuA ที่ได้ตัดส่วน tandem repeat ซึ่งยาวชุดละ 57 คู่เบส จำนวน 2 ชุด ออกโดยวิธี mutagenic PCR โดยยีน leuA ทั้ง 2 แบบได้ถูกเชื่อมต่อเข้ากับ expression vector pET15b และ ทำการสร้างเอนไซม์ในแบคทีเรีย Escherichia coli สายพันธุ์ BL21 (DE3) ซึ่งจากการปรับหาสภาวะที่เหมาะสม พบว่าเอนไซม์ทั้ง 2 แบบถูกสร้างได้ดี เมื่อใช้สาร isopropylthio-β-galactoside ที่ความเข้มข้น 0.5 มิลลิโมลาร์ ในการกระตุ้นการทำงานของยีนและใช้อุณหภูมิ 25 ํซ เป็นเวลา 3-6 ชั่วโมง ผลการศึกษาพบว่ายีน leuA ที่ถูกตัดส่วน tandem repeat ออก สามารถกำหนดการสร้าง α-IPMS ที่มี activity เทียบเท่าเอนไซม์ที่สร้างจากยีนปกติ โดยที่ mutated α-IPMS มีคุณสมบัติพื้นฐานใกล้เคียง กับเอนไซม์ปกติ ซึ่งได้แก่ อุณหภูมิ และค่าพีเอชที่เหมาะสมในการทำงาน ความเสถียรในสภาพพีเอชต่างๆ และจำนวนหน่วยย่อยของเอนไซม์ สำหรับค่าน้ำหนักโมเลกุลของหน่วย ย่อยของเอนไซม์พบว่า mutated α-IPMS มีขนาดเล็กลง ซึ่งเป็นผลมาจากการตัดส่วนของ tandem repeats ของยีน leuA ออก ผลจากการศึกษาเบื้องต้นนี้แสดงให้เห็นว่า tandem repeat ดังกล่าว อาจไม่มีความสัมพันธ์กับยีน leuA ในแง่การแสดงออกของยีน และคุณสมบัติพื้นฐานของเอนไซม์ α-IPMS In order to investigate for the role and significance of tandem repeat within Mycobacterium tuberculosis leuA gene encoding alpha-isopropylmatate synthase (α-IPMS), we compared the properties of native α-IPMS and mutated α-IPMS of which the 2 copies of 57 bp repeats had been deleted. By using mutagenic PCR procedure, we successfully constructed a recombinant plasmid of pET15b expression vector carrying the mutated gene. Optimum expression conditions were studied and properties of gene products were compared. Mutated gene was optimally amplified at 64 ํC annealing temperature and well expressed in Escherichia coli BL21(DE3) at 25 ํ C for 3-6 hrs using isopropylthio-β-galactoside at the final concentration of 0.5 mM as inducer. Properties of both native and mutated enzymes were compared. The results showed that with deletion of the 2 copies of 57 bp tandem repeats, the mutated leuA can well expressed to a functional mutated α-IPMS. The basic properties of mutated α-IPMS was similar to the native α-IPMS. Mutated α-IPMS was smaller. corresponding to the deleted 2 copies of 19 amino acid repeats and the native form of the enzyme was also dimer. The optimal temperature and optimal pH for enzyme activity was between 30 ํ-50 ํ C and 7.5 respectively. The stability of mutated α-IPMS also similar to the native α-IPMS. From this study, significant differenes was not observed between the two types of enzyme. These result showed that the 2 cpoies of 57 bp tandem repeats may have no relation to leuA expression and α-IPMS basic properties