| ชื่อเรื่อง | : | เทคโนโลยี RNA interference เพื่อการควบคุมและป้องกันโรคตัวแดงจุดขาว (WSSV) และ HPV ในกุ้งกุลาดำ |
| นักวิจัย | : | สกล พันธุ์ยิ้ม |
| คำค้น | : | doublestanded RNA , HPV , P. monodon , PmDNV , RNA interference , WSSV , การควบคุมและป้องกันโรคตัวแดงจุดขาว (WSSV) , กุ้งกุลาดำ , เทคโนโลยี RNA interference |
| หน่วยงาน | : | สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2554 |
| อ้างอิง | : | http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=DBG5080005 , http://research.trf.or.th/node/2645 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | อุตสาหกรรมการเลี้ยงกุ้งในประเทศไทย ประสบปัญหาการสูญเสียมูลค่าการส่งออกประมาณ 25% จากการติดเชื้อไวรัส ปัจจุบันยังไม่มีวิธีการป้องกันหรือรักษาโรคติดเชื้อไวรัสในกุ้ง งานวิจัยนี้มีจุดมุ่งหมายในการป้องกันและลดการสูญเสียกุ้งจากการติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว (WSSV) และไวรัสตับ (HPV) ในกุ้งกุลาดำWSSV เป็นไวรัสซึ่งทำให้กุ้งตายอย่างรวดเร็วส่วน HPV ทำให้กุ้งติดเชื้อโตช้า ส่งผลต่อการเสียหายในคุณค่าเทคโนโลยี RNAi สามารป้องกันและรักษาการติดเชื้อไวรัสหัวเหลืองได้ดี จึงได้นำมาใช้ในการศึกษานี้ โดยในการป้องกันการติดเชื้อWSSV และการตายจากการติดเชื้อดังกล่าว ได้ออกแบบและสร้าง DNA เส้นคู่ (dsRNA) ขนาดประมาณ 400 เบส ซึ่งมีลำดับเบสตรงกับยีน 6 ชนิด (ie1, ie3, pol, rr2, vp26 และ vp28) ของ WSSV ซึ่งสำคัญในการการเพิ่มปริมาณ โดย dsRNA ดังกล่าวได้มีการออกแบบให้สร้างในแบคทีเรีย E.coli เมื่อสกัดแยก dsRNA จาก E.coliนำมาฉีดเข้าสู่เลือดกุ้งพบว่า สามารถป้องกันการติดเชื้อWSSV ได้ในระดับต่างๆ โดย dsRNA ต่อ rr2 ให้ผลยับยั้งการเพิ่มจำนวน WSSV ในกุ้งสูงสุด รองลงมาได้แก่ dsRNA ต่อ ie3, vp26, vp28, ie1 และ pol จาก WSSV (rr2>ie3>vp26=vp28>ie1> pol) เมื่อทดสอบการป้องกันกุ้ง ตายจาก WSSV ก็พบว่า dsRNA ต่อ rr2 สามารถป้องกันการตายจากเชื้อ dsRNAต่อRab7 (สามารถ knock-down ยีน Rab7 ของกุ้งได้) ก็สามารถป้องกันการตายของกุ้งจากเชื้อWSSV ได้ดีเช่นกัน สำหรับการใช้ dsRNA ป้องกันการติดเชื้อHPV ได้ออกแบบและสร้างdsRNAขนาด409bp ต่อ non-structural protein (NS1) และขนาด 422 bp ต่อ structural protein (VP) โดย ทำการสร้างและผลิต dsRNA ดังกล่าว ในแบคทีเรียE.coli เมื่อประสบความสำเร็จในการทำให้กุ้งกุลาดำติดเชื้อHPV ได้โดยการให้กินตับกุ้ง จึงได้ฉีด dsRNA เข้าสู่ระบบเลือดกุ้งเพื่อป้องกันการติดเชื้อHPV พบว่า dsRNA ต่อ NS1 ให้ผลในการป้องกันดีกว่า dsRNAต่อVP นอกจากนี้เมื่อใช้ dsRNA ในการรักษากุ้งติดเชื้อHPV ก็พบว่า dsRNAต่อNS1 สามารถลดปริมาณเชื้อHPV ในกุ้งที่ติดมาแล้วจากบ่อเลี้ยงได้ ผลการทดลองนี้กำลังนำไปสู่วิธีการรักษากุ้งติดเชื้อHPVในบ่อเลี้ยงในอนาคตงานวิจัยนี้ได้ผลิตผลงานตีพิมพ์ในวารสารนานาชาติ 8 เรื่อง และกำลังอยู่ในระหว่างพิจารณาตีพิมพ์ 1 เรื่อง พร้อมผลิตนักวิจัยวุฒิปริญญาโท 2 คน Shrimp culture in Thailand has suffered as much as 25% loss form viral diseases. Effective prevention or treatment of viral infected shrimps is not yet achievable. This research aims to develop an effective means to prevent and/or protect Peneaus monodon shrimp from white spot syndrome virus (WSSV) and hepatopancreatic parvovirus (HPV) infection. WSSV caused high mortality in Peneaus monodon whereas HPV caused loss in production yield. RNA interference technology, using dsRNA was employed to prevent WSSV infection and shrimp mortality. Aproximately 400bp double stranded RNA corresponding to 6 important WSSV genes (ie1, ie3, pol, rr2, vp26 and vp28) was designed and produced in bacteria E.coli. Injection of the dsRNA into shrimp haemolymph gave varying degree of preventing WSSV infection. Double-stranded RNA corresponding to rr2 gene gave the strongest, while that of pol the least (rr2>ie3>vp26=vp28>ie1>pol) protection. rr2-dsRNA could also protect shrimp from mortality if infected with WSSV. A combination of rr2-dsRNA and Rab7-dsRNA which knocked down shrimp gene could also prevent shrimp mortality from WSSV infection. For prevention of HPV infection, dsRNA (409bp) corresponding to nonstructural protein 1 (NS1) and dsRNA (422bp) structural protein (VP) were designed and synthesized in E.coli. The HPV infection was experimentally achieved by feeding infected hepatopanereas since experimentally infection of HPV by injection was not achievable. Injection of NS1-dsRNA into the haemolymph protected HPV infection more effective than the VP-dsRNA. In addition, NS1-dsRNA could reduce severity of HPV in pond-infected shrimp. This should pave the way to cure HPV infection in shrimp culture. This research has produced 8 international publications, 1 submitted manuscript and 2 M.Sc. graduates. |
| บรรณานุกรม | : |
สกล พันธุ์ยิ้ม . (2554). เทคโนโลยี RNA interference เพื่อการควบคุมและป้องกันโรคตัวแดงจุดขาว (WSSV) และ HPV ในกุ้งกุลาดำ.
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย. สกล พันธุ์ยิ้ม . 2554. "เทคโนโลยี RNA interference เพื่อการควบคุมและป้องกันโรคตัวแดงจุดขาว (WSSV) และ HPV ในกุ้งกุลาดำ".
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย. สกล พันธุ์ยิ้ม . "เทคโนโลยี RNA interference เพื่อการควบคุมและป้องกันโรคตัวแดงจุดขาว (WSSV) และ HPV ในกุ้งกุลาดำ."
กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2554. Print. สกล พันธุ์ยิ้ม . เทคโนโลยี RNA interference เพื่อการควบคุมและป้องกันโรคตัวแดงจุดขาว (WSSV) และ HPV ในกุ้งกุลาดำ. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2554.
|
