วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2548

การคัดกรองลีแวนเนสที่ย่อยลีแวนให้ผลิตภัณฑ์เป็นลีแวนไบโอส หรือ ลีแวนไตรโอส จากแบคทีเรีย ได้ไอโซเลตที่มีค่าแอคติวิตีของเอนไซม์สูงสุดซึ่งเมื่อวิเคราะห์ด้วยลำดับเบสของยีน 16S rRNA พบว่าเป็น Microbacterium sp. ภาวะที่เหมาะสมในการผลิตลีแวนเนสเมื่อเลี้ยงแบคทีเรียนี้ใน levan minimum medium คือ pH 7.0 ที่อุณหภูมิ 40C เป็นระยะเวลา 12–20 ชั่วโมง หลังจากทำเอนไซม์ให้บริสุทธิ์บางส่วนโดยตกตะกอนด้วยเกลือแอมโมเนียมซัลเฟต ติดตามด้วยการแยกโดยโครมาโตกราฟฟีคอลัมน์ดีอีเออีโตโยเพิร์ล และคอลัมน์บิวทิล โตโยเพิร์ล เอนไซม์จะมีความบริสุทธิ์ขึ้น 9 เท่า เหลือแถบโปรตีน 2 แถบ ซึ่งติดสีย้อมแอคติวิตีเพียง 1 แถบ น้ำหนักโมเลกุลของลีแวนเนสเมื่อวิเคราะห์โดยคอลัมน์เซฟาเด็กซ์จี-100 มีค่า 43,900 ดาลตัน และวิเคราะห์โดยเอสดีเอส-พอลิอะคริลาไมด์เจลอิเลคโทรโฟริซิสมีค่า 43,800 ดาลตัน ค่า pH ที่เหมาะสมสำหรับการทำงานของลีแวนเนสที่บริสุทธิ์บางส่วน คือ 7.0 ใน cacodylate buffer และมีเสถียรภาพสูงสุดใน glycine-HCl buffer ที่ pH 8.0–9.0 อุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับการทำงานของลีแวนเนส คือ 37C และเอนไซม์มีเสถียรภาพสูงสุดที่อุณหภูมิ 30C เอนไซม์นี้มีความจำเพาะต่อลีแวนสูงมาก ไม่สามารถย่อยสับสเทรตชนิดอื่นได้ นอกจากนี้ยังพบว่า serine อาจจะมีส่วนเกี่ยวข้องกับการทำงานของเอนไซม์และควรจะมีโลหะเป็นโคแฟกเตอร์ ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการย่อยลีแวนด้วยเอนไซม์นี้คือ ลีแวนไบโอส และ ลีแวนไตรโอส โดยมีลีแวนไบโอสเป็นผลิตภัณฑ์หลัก การย่อยลีแวนของลีแวนเนสเป็นการย่อยจากด้านปลาย (exo-acting manner)