วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2546

ได้แยกยีนประมวลรหัสไดออกซิจีเนสสำหรับการย่อยสลายอะซีแนพธิลีนจาก Rhizobium sp. สายพันธุ์กลาย D2 ที่เกิดจากการสอดแทรกโดยทรานสโปซอน Tn5 และมีความบกพร่องในการย่อยสลายอะซีแนพธิลีน ด้วยเทคนิคเซาท์เธอร์นไฮบริไดเซชันโดยใช้ชิ้นส่วนของทรานสโปซอน Tn5 เป็นดีเอ็นเอติดตาม คัดแยกและโคลนชิ้นดีเอ็นเอที่ให้สัญญาณจากการไฮบริไดซ์ หาลำดับนิวคลีโอไทด์ข้างเคียงทรานสโปซอน จากการเปรียบเทียบลำดับกรดอะมิโนที่แปลรหัสมาจากลำดับนิวคลีโอไทด์ขนาด 523 bp ที่ได้กับข้อมูลใน GenBank พบว่าลำดับกรดอะมิโนที่ได้มีความเหมือนกับ alpha subunit ของไดออกซิจีเนสใน Xanthobacter polyaromaticivorans สายพันธุ์ 127W เท่ากับ 69% สร้างดีเอ็นเอติดตามจากชิ้นดีเอ็นเอข้างเคียงทรานสโปซอนดังกล่าวด้วยวิธี PCR สามารถโคลนชิ้นดีเอ็นเอ BamHI-EcoRI ขนาด 5.9 kb ที่ให้สัญญาณกับดีเอ็นเอติดตามเข้ายังพลาสมิด pBluescript KS(+/-) และตั้งชื่อพลาสมิดนี้ว่า pDE จากการหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของชิ้นดีเอ็นเอนี้ พบกรอบอ่านรหัสเปิด (ORFs) ทั้งหมด 5 กรอบ ซึ่งมีทิศทางการถอดรหัสไปทางเดียวกันตามลำดับดังนี้ ORF1 (acnAc) มีลำดับกรดอะมิโนที่มีความเหมือน 76% กับ alpha subunit ของไดออกซิจีเนสใน Xanthobacter sp. สายพันธุ์ 127W ORF2 (acnAd) มีลำดับกรดอะมิโนที่มีความเหมือน 60% กับ beta subunit ของไดออกซิจีเนสใน Xanthobacter sp. สายพันธุ์ 127W ORF3 (acnAb) มีลำดับกรดอะมิโนที่มีความเหมือน 71% กับเฟอร์รีดอกซินของไดออกซิจีเนสใน Xanthobacter sp. สายพันธุ์ 127W ORF4 (acnB) มีลำดับกรดอะมิโนที่มีความเหมือน 67% กับไดไฮโดรไดออลดีไฮโดรจีเนสใน Xanthobacter sp. สายพันธุ์ 127W ORF5 (acnF) เป็นกรอบอ่านรหัสเปิดที่ไม่สมบูรณ์ มีลำดับกรดอะมิโนที่มีความเหมือน 65% กับอัลดีไฮด์ดีไฮโดรจีเนสใน Burkholderia sp. สายพันธุ์ RP007 การศึกษานี้เป็นรายงานแรกที่ได้กล่าวถึงยีนประมวลรหัสไดออกซิจีเนสที่เกี่ยวข้องกับการย่อยสลายอะซีแนพธิลีนใน Rhizobium sp. CU-A1 คือ ยีน acnAbAcAd