วัตถุประสงค์ของโครงการคือเพื่อโคลนยีนและศึกษาลำดับนิวคลีโอไทด์โปรตีนห่อหุ้มและยีน replicase ของเชื้อ PStV severe necrotic strain (PStV-SN), ริเริ่มงานวิจัยทางด้านอณูชีววิทยาของ เชื้อไวรัสสาเหตุโรคพืช ณ ภาควิชาโรคพืชวิทยา คณะเกษตรศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น โดยมีวิธี การวิจัยดังนี้ เพิ่มปริมาณเชื้อไวรัส PStV-SN บนถั่วลิสงไทนาน 9 สังเกตอาการของโรคที่เกิดขึ้นและ เก็บใบที่เป็นโรคหลังจากปลูกเชื้อได้ 14-21 วันสำหรับนำไปแยกไวรัสบริสุทธิ์ ศึกษาคุณสมบัติของกรด นิวคลีอิกของอนุภาคไวรัสโดยปฏิกิริยาของเอนไซม์ ศึกษาชนิดและน้ำหนักโมเลกุลโปรตีนห่อหุ้ม อนุภาคโดยวิธี SDS-PAGE โคลนยีนเป้าหมายด้วยเทคนิค cDNA cloning แบบมาตรฐานและ RT- PCR cloning โดยใช้ PStV-SN RNA เป็นต้นแบบ ตรวจหาและวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ ด้วย โปรแกรม DNASIS version 3.7 ผลการวิจัยพบว่าเชื้อ PStV-SN ทำให้เกิดอาการเนื้อเยื่อตายแบบรุน แรงในถั่วลิสง ใบด่างและบิดเบี้ยว ต้นแคระแกร็น จากใบถั่วลิสงเป็นโรค 100 กรัมแยกสกัดไวรัสบริสุท ธิ์ได้ 8-9 มิลลิกรัม PStV-SN มีอนุภาคเป็นท่อนยาวคด จีโนมแบบ single strand RNA และโปรตีนห่อ หุ้มมีน้ำหนักโมเลกุล 32 กิโลดาลตัน ทราบลำดับนิวคลีโอไทด์ในส่วนปลาย 3’ ของจีโนม PStV-SN จำนวน 2,793 นิวคลีโอไทด์(nt) ประกอบด้วยบางส่วนของยีน NIa (114 nt), ยีน replicase (1,548 nt), ยีนโปรตีนห่อหุ้ม (861 nt), ส่วน 3’ non-coding region (3'-NCR) (253 nt) และ poly A tail (17 nt) สรุปได้วา PStV-SN มีคุณสมบัติเป็นไวรัสในวงศ์ Potyviridae ยีนโปรตีนห่อหุ้มมีขนาด 861 nt และยีน replicase มีขนาด 1,548 nt จากข้อมูลลำดับนิวคลีโอไทด์และกรดอะมิโนของโปรตีนห่อหุ้ม และ 3'- NCR เชื้อ PStV-SN จำแนกเป็น PStV สายพันธุ์ใหม่ ข้อเสนอแนะสำหรับงานวิจัยในอนาคตคือการ ปรับปรุงพันธุ์ถั่วลิสงที่ปลูกเป็นการค้าในประเทศไทยให้ต้านทานต่อเชื้อ PStV โดยการทำพันธุ วิศวกรรมด้วยยีนโปรตีนห่อหุ้ม และ/หรือยีน replicase จาก PStV-SN Objectives is to clone and determine nucleotide sequence of coat protein and replicase genes of peanut stripe virus-severe necrotic strain (PStV-SN), and to initiate the research works on molecular biology of plant viruses at Dept. of Plant Pathology, Khon Kaen Uni. PStV-SN was propagated on peanut tainan 9 plants. Type of disease symptom was observed. The infected leaves were harvested at 14-21 days after inoculation for virus purification. Type of nucleic acid extracted from PStV-SN particles was determined by enzymatic reaction. Species and molecular weight of coat protein subunits were studied by SDS-PAGE. Standard cDNA cloning and RT-PCR cloning were carried out using PStV-SN RNA as template. Nucleotide sequence of coat protein and replicase genes were examined and analysed using DNASIS version 3.7 . PStV-SN caused severe necrotic, mottle, leaf distortion, stunt and sometimes rapidly wilt on peanut Tainan 9. Purified virus was archieved 8-9 mg from 100 gm of infected peanut leaves. The virus particle is flexuous rod shape, single strand RNA genome, one species of coat protein subunit approximated 32 kDa. Total of 2,793 nuclotides of 3'-terminal region of virus genome were sequenced, including partial of NIa gene(114 nt), replicase gene (1,548 nt), coat protein gene (861 nt), 3’ non-coding region (3’ NCR) (253 nt) and poly A tail (17 nt), respectively. PStV-SN belongs to the family Potyviridae. PStV-SN RNA contains 861 nt coding for coat protein and 1,548 nt coding for replicase genes. Based upon nucleotide and amino acid sequences comparison, PStV-SN is classified as a new strain of PStV. Further Implication is improvement of commercial Thai-peanut cultivars for resistant to PStV by genetically engineered with coat protein gene and/or replicase gene of PStV-SN.