ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การแยกและการศึกษาการแสดงออกของยีนสังเคราะห์โปรตีนโครงสร้าง 65 กิโลดาลตัน จากเชื้อไวรัสหัวเหลือง

หน่วยงาน ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การแยกและการศึกษาการแสดงออกของยีนสังเคราะห์โปรตีนโครงสร้าง 65 กิโลดาลตัน จากเชื้อไวรัสหัวเหลือง
นักวิจัย : ศศิมนัส อุณจักร์
คำค้น : PENAEUS MONODON , YELLOW HEAD VIRUS
หน่วยงาน : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2545
อ้างอิง : http://www.thaithesis.org/detail.php?id=47279
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

~bไวรัสหัวเหลือง~b (YHV) เป็นสาเหตุหลักในการก่อความเสียหายในอุตสาหกรรม การเลี้ยงกุ้งกุลาดำ ไวรัสที่ใช้เตรียมได้จากเลือดของกุ้งกุลาดำที่ติดเชื้อไวรัสหัวเหลือง ที่นำไปปั่นแยกใน gradient ultracentrifugation โครงสร้างของเชื้อไวรัสที่แยกได้ ศึกษาภายใต้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนพบโครงสร้างแบบแท่ง ขนาดประมาณ 146-200 x 53 nm ภายนอกล้อมรอบด้วยชั้นของเปลือกหุ้มประกอบไปด้วยโครงสร้างคล้ายหนาม และภายในยังมี โครงสร้างของ nucleocapsids ซึ่งเป็นลักษณะคล้ายแท่งเกลียว ขนาดประมาณ 33-36 nm องค์ประกอบทางโปรตีนโครงสร้างของไวรัส ประกอบด้วยโปรตีน 3 ชนิด คือ 116, 65 และ 20 กิโลดาลตัน นอกจากนี้การศึกษาการเติมหมู่น้ำตาลของโปรตีนด้วยชุดทดสอบ ECL glycoprotein detection module (Pharmacia Amersham) และการย้อมสีบน SDS-PAGE ด้วย Thymol พบว่า โปรตีนโครงสร้างขนาด 116 และ 65 กิโลดาลตันมีการเติมหมู่น้ำตาล และเรียกชื่อว่า gp116, gp65 และ vp20 ตามลำดับ ต่อมาจึงหาลำดับกรดอะมิโนด้านปลาย N ของ gp116 และ gp65 ซึ่งได้แก่ T-l-L-S-G-l-P-E-K-D- และ L-A-P-R-Q-A-R-V-X-G- (X, ลำดับกรดอะมิโนที่ไม่แม่นยำ). การผลิตโพลีโคลนอล แอนติบอดีที่จำเพาะต่อโปรตีน โครงสร้างทั้งสอง คือ gp116 และ gp65 นั้น เตรียมจากไวรัสบริสุทธิ์ที่นำมาแยกโปรตีน โครงสร้างแต่ละชนิดด้วย SDS-PAGE. เนื่องจากลำดับนิวคลีโอไทด์ของไวรัสหัวเหลืองในส่วน ORF3 ยังไม่สมบูรณ์ จึงได้หาลำดับนิวคลีโอไทด์ที่เหลือ คือจากลำดับอะมิโนที่ 504-1201 จากนั้น จึงเปรียบเทียบระหว่างลำดับกรดอะมิโนด้านปลาย N ของ gp116 และ gp65 และ ลำดับกรดอะมิโนที่ได้จาก ORF3 พบตำแหน่งที่ตรงกันที่ลำดับอะมิโน 229 และ 1128 ทั้งนี้ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่สังเคราะห์โปรตีน gp65 ยาว 1,619 เบส ซึ่งจะแปลรหัส ให้โปรตีนที่มีลำดับกรดอะมิโน 539 ตัว โดยกรดอะมิโนที่ปลายด้าน C ประมาณ 20 ตัว จะแทรกเข้าไปในส่วนเมมเบรน ยีนที่สร้างโปรตีนขนาด 65 กิโลดาลตันนี้จะนำไปศึกษาการ แสดงออกใน ~iEscherichia coli~i การแสดงออกของโปรตีนที่สร้างจากยีนที่แปลรหัสให้ gp65 ที่มีการเติมหมู่ฮิสทิดีนนั้นมีการแสดงออกต่ำมาก แต่เมื่อตัดส่วนปลายของยีนที่ สังเคราะห์ให้ส่วนที่แทรกเข้าไปในเมมเบรนทิ้งและนำไปศึกษาการแสดงออกอีกครั้ง พบว่า มีการแสดงออกอย่างดี โปรตีนที่แสดงออกมีขนาดประมาณ 56 กิโลดาลตัน ซึ่งความแตกต่าง ของขนาดโปรตีนที่แสดงออกและโปรตีนในไวรัสนั้นเกิดจากกระบวนการต่างๆ ที่เกิดขึ้น หลังจากการแปลรหัสโปรตีน เช่น การเติมหมู่น้ำตาล เป็นต้น

บรรณานุกรม :
ศศิมนัส อุณจักร์ . (2545). การแยกและการศึกษาการแสดงออกของยีนสังเคราะห์โปรตีนโครงสร้าง 65 กิโลดาลตัน จากเชื้อไวรัสหัวเหลือง.
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
ศศิมนัส อุณจักร์ . 2545. "การแยกและการศึกษาการแสดงออกของยีนสังเคราะห์โปรตีนโครงสร้าง 65 กิโลดาลตัน จากเชื้อไวรัสหัวเหลือง".
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
ศศิมนัส อุณจักร์ . "การแยกและการศึกษาการแสดงออกของยีนสังเคราะห์โปรตีนโครงสร้าง 65 กิโลดาลตัน จากเชื้อไวรัสหัวเหลือง."
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2545. Print.
ศศิมนัส อุณจักร์ . การแยกและการศึกษาการแสดงออกของยีนสังเคราะห์โปรตีนโครงสร้าง 65 กิโลดาลตัน จากเชื้อไวรัสหัวเหลือง. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2545.