~iXanthomonas campestris~i pv. ~iphaseoli (Xp)~i สร้าง catalases ประเภท monofunction สองไอโซไซม์ คือ KatA และ KatE ในการศึกษาครั้งนี้ได้ทำการ โคลนยีน ~ikatA~i ซึ่งเป็น major catalase ของ ~iXp~i โดยงานวิจัยนี้ใช้เทคนิคทางด้าน reverse genetic เพื่อออกแบบ degenerate primers สองเส้น โดยเส้นแรกได้จาก partial amino acid sequence ของโปรตีน KatA ที่ได้จาก ~iXp~iHR (เป็น ~iXp~i ที่กลายพันธุ์แบบเกิดขึ้นเอง ซึ่งผลิตเอนไซม์ KatA ได้ในปริมาณมาก) และ เส้นที่สอง ได้จากบริเวณ conserved ของ monofunctional catalases ต่าง ๆ จากนั้นใช้วิธี PCR เพื่อสร้าง probe ที่จำเพาะกับ ~ikatA~i โดยใช้ ~iXp~i genomic DNA เป็น template ได้ผลผลิตจาก PCR ขนาด 344 bp จากนั้นได้นำ ~ikatA~i probe มาใช้ในการแยกหายีน ~ikatA~i ที่สมบูรณ์จากห้องสมุดจีโนมของเชื้อ ~iXp~i ใน (+,l)ZipLox phage โดยวิธี plaque hybridization ได้โคลนที่ให้ชื่อว่า pKat29 ซึ่งมียีน ~ikatA~i ที่สมบูรณ์ เมื่อนำ pKat29 ไปวิเคราะห์พบว่ายีน ~ikatA~i มีขนาด 1,521 bp แปลรหัสโปรตีนขนาด 507 กรดอะมิโนและมีมวลโมเลกุลจากการคำนวณเท่ากับ 56 กิโลดาลตัน นอกจากนี้ยังพบว่า มียีน ~iankA~i อยู่ถัดจาก ~ikatA~i ทางด้าน downstream โดยมีขนาด 624 bp แปรรหัส โปรตีนขนาด 208 กรดอะมิโนและมีมวลโมเลกุลจากการคำนวณเท่ากับ 23 กิโลดาลตัน จากผล การวิเคราะห์ด้วย Northern blot พบว่าการถอดรหัสของยีน ~ikatA~i และ ~iankA~i เป็นแบบ polycistronic mRNA และจากการวิเคราะห์ด้วย Southern blot พบว่า ~ikatA~i เป็นยีนที่มีเพียงหนึ่งชุดบนโครโมโซมและยังพบได้ในเชื้อ ~iXanthomonas~i อื่นอีก หลายสปีชีส์ จากการเปรียบเทียบลำดับกรดอะมิโนพบว่ายีน ~ikatA~i นี้มีความคล้ายกับ monofunctional catalase อื่น ๆ โดยสามารถจัดให้อยู่ใน catalase กลุ่ม 1 จากการ วิเคราะห์คุณสมบัติทางจลน์ศาสตร์ทางของเอนไซม์ KatA พบว่ามีค่าปรากฏ K(,m) and V(,max) คือ 75 มิลลิโมลของความเข้มข้น H(,2)O(,2) และ 2.55 X 10(5) ไมโครโมล H(,2)O(,2) ไมโครโมล heme(-1) วินาที(-1) ตามลำดับ และมีค่า k(,cat) ที่จุด V(,max) เท่ากับ 2.55 X 10(5) วินาที(-1) และ NaN(,3), 3-amino-1,2,4- triazole, hydroxylamine, NaCN สามารถยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ได้ และเอนไซม์มีการทำงานได้ดี ที่สุดช่วง pH แคบและทนความร้อนได้น้อยเมื่อเทียบกับ tetrameric catalases ประเภท monofunction ทั่วไป นอกจากนี้ได้ทำการสร้างแบคทีเรียที่เสียการทำงานของ ~ikatA~i ใน ~iXp~i (~iXp katA~i) และ ~iXp~i mutant อื่น ๆ ที่เกี่ยวข้องเพื่อศึกษาคุณสมบัติ ทางสรีรวิทยาของ ~ikatA~i พบว่า ~ikatA~i mutant มีความไวต่อ H(,2)O(,2) แต่ต้านทาน ต่อ organic peroxide tBOOH แสดงว่ายีน ~ikatA~i มีบทบาทสำคัญในการต้านทาน H(,2)O(,2) และพบว่าใน ~iXp katA~i มีการสร้าง AhpC ในระดับที่มากขึ้นทำให้ต้านทาน ต่อ organic peroxide (tBOOH) ได้ นอกจากนี้ยังพบว่า ~iXp katA~i มีการตอบสนองแบบ adaptive ต่อ H(,2)O(,2) และแบบ cross-protection ต่อ H(,2)O(,2) เมื่อเซลล์ถูก เหนี่ยวนำด้วย menadione (สารที่สร้าง superoxide) ที่มีความเข้มข้นต่ำ ความรู้ที่ได้ จากการวิจัยครั้งนี้จะสามารถเป็นพื้นฐานระดับโมเลกุลของเอนไซม์ Catalase ใน ~iXp~i เพื่อนำไปสู่การพัฒนางานวิจัยเกี่ยวกับหน้าที่และการควบคุมการทำงานของยีนนี้และความ สัมพันธ์กับยีนอื่นที่เกี่ยวข้องกับ oxidative stress response