จุดประสงค์ของการวิจัยครั้งนี้ คือ การเปลี่ยนแปลงกรดอะมิโนของ penicillin G acylase (PGA) เพื่อที่จะสามารถนำไปใช้ตรึงบนตัวค้ำจุน thiopropyl agarose สำหรับ ใช้ในขบวนการผลิต 6-aminopenicillanic acid ใน enzyme column reactor ในการศึกษาครั้งนี้ได้ตัดต่อยีน ~ipac~i จาก ~iB. megaterium~i UN-1 เข้าใน เวคเตอร์พาหะ pRB373 ซึ่งเป็น ~iEscherichia coli-Bacillus~i shuttle vector และถ่ายโอนพลาสมิดเวคเตอร์นี้เข้าสู่ ~iE. coli~i XL1-blue เพื่อเพิ่มปริมาณ จากนั้น นำพลาสมิดนี้มาทำให้เกิดการกลายพันธุ์อย่างเจาะจงต่อยีน ~ipac~i โดยเปลี่ยนนิวคลีโอไทด์ ตำแหน่งที่ 2404-2406 จาก AAG เป็น TGT ซึ่งเป็นผลให้กรดอะมิโนตัวสุดท้าย (ตำแหน่ง 802) ของโปรตีนตั้งต้นเปลี่ยนจาก lysine เป็น cysteine ต่อมาได้มีการชักนำพลาสมิดที่กลายพันธุ์ นี้เข้าสู่ ~iB. megaterium~i UN-CAT1 โดยวิธี protoplast transformation ซึ่งเมื่อ อยู่ใน ~iBacillus~i เจ้าบ้านนี้ ยีน ~ipac~i ที่กลายพันธุ์สามารถแสดงออกได้ดีภายใต้ การควบคุมของ promoter ของตนเอง โปรตีนตั้งต้นที่เกิดขึ้นผ่านกระบวนการเปลี่ยนแปลงได้ อย่างถูกต้องและเกิดเป็นเอนไซม์ที่สมบูรณ์ เอนไซม์ที่กลายพันธุ์สามารถทำให้บริสุทธิ์ได้ ภายในขั้นตอนเดียวโดยใช้ cation exchange chromatography เพื่อนำไปศึกษาโครงสร้าง และกิจกรรมของเอนไซม์ พบว่าประกอบด้วยหน่วยย่อย (+,a) และหน่วยย่อย (+,b) ที่มีขนาด เหมือนกับเอนไซม์ดั้งเดิม นอกจากนั้นยังพบว่ามีหมู่ reactive thiol อยู่ 0.48 โมลต่อ เอนไซม์ 1 โมลและค่า specific activity ของเอนไซม์ที่กลายพันธุ์มีค่าใกล้เคียงกับ เอนไซม์ดั้งเดิม โดยที่เอนไซม์ทั้งสองมีค่า optimum pH, optimum temperature, pH stability และ thermal stability คล้ายกัน เอนไซม์ที่กลายพันธุ์สามารถนำไปตรึงกับ เจลโดยใช้หมู่ thiol ของ cysteine ตรึงกับ thiopropyl sepharose 6B ซึ่งใช้เอนไซม์ 20 (+,m)g ต่อน้ำหนักเจลแห้ง 9 mg เอนไซม์กลายพันธุ์ที่ตรึงแล้วถูกนำมาใช้ในขบวนการผลิต 6-APA ใน enzyme column reactor ซึ่งในขบวนการผลิตอย่างต่อเนื่องได้ 6-APA จากการ ย่อยสลายของ penicillin G เกิดขึ้น 2.03% โดยสรุปแล้วการวิจัยนี้สามารถพิสูจน์ได้ว่าการแทนที่กรดอะมิโน lysine ด้วย cysteine ที่ C-terminal ของ penicillin acylase ของ ~iBacillus~i ไม่มีการส่งผลกระทบ ต่อการแสดงออกและเกิดขบวนการการเปลี่ยนแปลงได้อย่างถูกต้องโดยเกิดเป็นเอนไซม์ที่สมบูรณ์ ได้ เอนไซม์ที่กลายพันธุ์สามารถนำมาตรึงบนเจล thiopropyl agarose ซึ่งนำมาใช้ใน enzyme reactor column ได้ตามจุดประสงค์ที่ต้องการ ในการปรับปรุงเพื่อให้เกิดการตรึง ที่ดีขึ้นและเพิ่มกิจกรรมของเอนไซม์ตรึง มีการเสนอแนะว่าควรเพิ่มความยาวของสายเปปไทด์ ทางด้าน C-terminal ให้ยาวมากขึ้นกว่าเดิมโดยให้มีกรดอะมิโน cysteine มากกว่าหนึ่งตัว ในสายของเปปไทด์