| ชื่อเรื่อง | : | การแสดงออกร่วมกันของยีนไคติเนสและยีน ~icry3A~i ในเชื้อ ~iBacillus thuringiensis~i |
| นักวิจัย | : | มณฑล เลิศคณาวนิชกุล |
| คำค้น | : | CHITINASE GENE , ~ICRY3A~I , ~IBACILLUS THURINGIENSIS~I , ~IBACILLUS CIRCULANS~I N0.4.1 , GENE EXPRESSION |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2543 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=44545 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ~iBacillus thuringiensis~i subsp. israelensis (B.t.i.)~i strain c4Q272 (Cry(-)) ที่มียีนไคติเนสจากเชื้อ ~iBacillus circulans~i No.4.1, pHYB43, มีความเสถียรรูปและผลิตเอนไซม์ไคติเนสได้ในปริมาณสูงกว่า ~iB.t.i.~i ที่มียีนไคติเนส จากเชื้อ ~iAeromonas hydrophila,~i pHYA2จึงได้ย้ายชิ้นยีนไคติเนสมาใส่ในพลาสมิด พาหะชนิดใหม่ชื่อว่า pBCX และตั้งชื่อว่า pBX43 พบว่าเชื้อ ~iB.t.i.~i ที่มีพลาสมิด pBX43 ผลิตเอนไซม์ไคติเนสในปริมาณที่สูงกว่า ~iB.t.i.~i ที่มี pHYB43 ถึง 3 เท่า เชื้อ ~iE.coli~i หรือ ~iB.subtilis~i ที่ได้รับยีนไคติเนสขนาดเต็มชิ้นสร้างเอนไซม์ขนาด 66 กิโลดาลตัน ในขณะที่เชื้อ ~iB.t.i.~i ที่ได้รับยีนไคติเนสสร้างเอนไซม์ขนาด 44 กิโลดาลตัน ซึ่งอาจเนื่องมาจากการเปลี่ยนแปลงขนาดมาจากเอนไซม์ 66 กิโลดาลตัน นอกจากนี้ได้นำยีน ~icry3A~i จากเชื้อ ~iB.t.tenebrionis~i มาใส่ในพลาสมิด pHY300PLK, pBCX หรือ pTFP ตั้งชื่อว่า pHY3A, pBX3A และ pTP3A ซึ่งเชื้อ ~iB.t.i.~i ที่มี pHY3A หรือ pBX3A ผลิต Cry3A ในปริมาณ 0.252 มก/มล และ 0.312 มก/มล ตามลำดับ แต่ ไม่พบใน ~iB.t.i.~i ที่มี pTP3A และพบว่าพลาสมิด pBX3A และ pTP3A มี segregration stability ใน ~iB.t.i.~i strain c4Q272 ต่ำกว่า pHY3A ภายใต้สภาวะที่ไม่มียาปฏิชีวนะ ดังนั้นจึงสร้างพลาสมิดชนิดใหม่จาก pHY3A เพื่อรวมยีนไคติเนสกับ ~icry3~iไว้ในพลาสมิด เดียวกัน ตั้งชื่อว่า pH3A43, pH3A43(E1) และ pH3A43(E5) เชื้อ ~iB.t.i.~i ที่ได้รับ พลาสมิดดังกล่วผลิตเอนไซม์ไคติเนสในระดับ 40 มิลลิยูนิต/มก. และมีเพียง ~iB.t.i.~i ที่มี pH3A43 ผลิต Cry3A ได้ในระดับ 0.053 มก/มล พลาสมิด pHY3A, pBX3A, pH3A43 และ pH3A43(E1) ผลิต ~icry3A-specific mRNA มากกว่า pTP3A และ pH3A43(E5) เชื้อ ~iB.t.i.~i ที่มียีน ~icry3A~i สร้างโปรตีนขนาด 66 กิโลดาลตัน ทั้งยีนไคติเนส และยีน ~icry3A~i มีความเสถียรรูปเมื่อนำเข้าสู่เชื้อ ~iB.t.i.~i พลาสมิด pHY3A อยู่ได้ใน ~iB.t.i.~i 30 วัน, pBCX จะลดลงทีละน้อย ส่วน pTFP, pHYB43, pBX43, pTP3A, pH3A43, pH3A43(E1) และ pH3A43(E5) อยู่ได้เพียง 2-3 วันเท่านั้นภายใต้สภาวะ ที่ไม่มียาปฏิชีวนะ เชื้อ ~iB.t.i.~i ที่มีพลาสมิดขนาดใหญ่ผลิตโปรตีนได้น้อยกว่าและ มีระดับ segregrational stability ต่ำกว่าเชื้อที่มีพลาสมิดขนาดเล็ก พบว่า ~iB.t.i.~i ที่มีพลาสมิดเหล่านั้นไม่ฆ่าหนอนแมลง ~iZophobus atratus~i แต่พบว่าไคติเนสเพิ่มความ เป็นพิษของ ~iB.t.~i subsp. ~iaizawai~i โดยที่ ~iB.t.~i subsp. ~iaizawai~i ที่มี พลาสมิดของยีนไคติเนส pHYA2 หรือ pHYB43 สามารถฆ่าหนอนแมลง gypsy moth ~i(Lymantria dispar)~i ได้ดีกว่า ~iB.t.~i subsp. ~iaizawai~i host แต่ในกรณีของ ~iB.t.i.~i strain c4Q272 ที่มีพลาสมิดของยีน ~icry1Aa (pHY1Aa) หรือยีนไคติเนสรวมกับยีน ~icrylAa (pH431Aa) ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในการฆ่าหนอนแมลงซึ่งอาจเนื่องมาจากเชื้อ ที่มียีน 2 ชนิดในเซลล์เดียวกันจะผลิตเอนไซม์ได้ในระดับต่ำซึ่งต้องมีการปรับปรุงให้มี การผลิตเอนไซม์ในปริมาณที่สูงขึ้นโดยใช้เทคนิคทางด้านgene manipulation ต่อไป |
| บรรณานุกรม | : |
มณฑล เลิศคณาวนิชกุล . (2543). การแสดงออกร่วมกันของยีนไคติเนสและยีน ~icry3A~i ในเชื้อ ~iBacillus thuringiensis~i.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. มณฑล เลิศคณาวนิชกุล . 2543. "การแสดงออกร่วมกันของยีนไคติเนสและยีน ~icry3A~i ในเชื้อ ~iBacillus thuringiensis~i".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. มณฑล เลิศคณาวนิชกุล . "การแสดงออกร่วมกันของยีนไคติเนสและยีน ~icry3A~i ในเชื้อ ~iBacillus thuringiensis~i."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2543. Print. มณฑล เลิศคณาวนิชกุล . การแสดงออกร่วมกันของยีนไคติเนสและยีน ~icry3A~i ในเชื้อ ~iBacillus thuringiensis~i. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2543.
|
