| ชื่อเรื่อง | : | การโคลนยีนและการแสดงออกของยีนสำหรับเอ็นไซม์ไดไฮโดรพเทอโรเอท ซินเทส จากเชื้อ ~iM. TUBERCULOSIS~i และ ~iM. LEPRAE~i |
| นักวิจัย | : | วนิดา นพพรพันธุ์ |
| คำค้น | : | DIHYDROPTEROATE SYNTHASE , M. tuberculosis M.leprae , DRUG TARGET , RESISTANCE TUBERCULOSIS , LEPROSY |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2542 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=44167 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ไดไฮโดรพเทอโรเอท ซินเทส (DHPS) เป็นเอ็นไซม์ที่มีบทบาทสำคัญมากในกระบวนการ สังเคราะห์โฟเลตภายในเซลล์ โดยเฉพาะในจุลชีพชั้นต่ำและโปรโตซัวซึ่งไม่สามารถรับโฟเลต จากสารอาหารภายนอกเซลล์ได้ DHPS จึงเป็นเอ็นไซม์ที่น่าสนใจในเชิงเคมีบำบัด โครงการนี้ จึงมีเป้าหมายที่จะโคลนยีนสำหรับเอ็นไซม์ DHPS จากเชื้อ ~iM. tuberculosis~i และ ~iM. leprae~i และทำการแสดงออกของยีนในแบคทีเรียเพื่อให้ได้เอ็นไซม์สายผสมในปริมาณ มากเพียงพอที่จะทำการศึกษาคุณสมบัติทางจลศาสตร์ การยับยั้งด้วยสารยับยั้งประเภทซัลฟา ตลอดจนศึกษาโครงสร้างสามมิติของเอ็นไซม์ ผู้วิจัยสามารถเลือกโคลนยีน dhps จาก genomic DNA libraries ที่เตรียมได้จากเชื้อ ~iM. tuberculosis~i และ ~iM. leprae~i แล้ว ทำการศึกษาหาลำดับเบส พบว่ายีน dhps ของ ~iM. tuberculosis~i มีขนาด 840 เบสคู่ ส่วนยีน dhps ของ ~iM. leprae~i มีขนาด 852 เบสคู่ ยีนทั้งสองเป็น monofunctional gene เมื่อทำการแสดงออกของยีน dhps ในเชื้อ ~iE.coli~i C600 (...)~ifolP~i::Km(r) ซึ่งเป็นสายพันธุ์ที่มีความบกพร่องของเอ็นไซม์ DHPS ได้ผลการแสดงออกของเอ็นไซม์ตามต้องการ เมื่อทำการแยกบริสุทธิ์เอ็นไซม์ด้วย DEAE-Sepharose ตามด้วย DyeMatrex Gel Green A และ Hydroxyapatite พบว่า เอ็นไซม์ DHPS ของทั้ง ~iM. tuberculosis~i และ ~iM. leprae~i มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 60 กิโลดาลตัน เมื่อวิเคราะห์เอ็นไซม์บริสุทธิ์ที่ได้ด้วย SDS-PAGE พบว่าเอ็นไซม์ DHPS ของ ~iM. tuberculosis~i มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 29 กิโลดาลตัน ขณะที่เอ็นไซม์ DHPS ของ ~iM. leprae~i มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 30 กิโลดาลตัน ข้อมูล ดังกล่าวบ่งชี้ให้เห็นว่าเอ็นไซม์ DHPSs ของ ~iM. tuberculosis~i และ ~iM. leprae~i น่าจะประกอบด้วยหน่วยย่อย 2 หน่วย การศึกษาคุณสมบัติทางจลศาสตร์ของเอ็นไซม์บริสุทธิ์พบว่า ค่า ~iK(,m)~i สำหรับ ~ip~i-aminobenzoic acid และ 6-hydroxymethyl-7,8-dihydropterin pyrophosphate สำหรับเอ็นไซม์ DHPS ของ ~iM. tuberculosis~i เป็น 0.37(+,ฑ)0.08 (+,m)M และ 1.03(+,ฑ)0.07 (+,m)M ตามลำดับ ค่า ~iK(,m)~i สำหรับเอ็นไซม์ DHPS ของ ~iM. leprae~i เป็น 0.6(+,ฑ)0.1 (+,m)M และ 1.2(+,ฑ)0.3 (+,m)M ตามลำดับ ผลการ ศึกษาการยับยั้งเอ็นไซม์ด้วยกลุ่มยาซัลฟา dapsone และ ~ip~i-aminosalicylic acid พบว่า dapsone เป็นยาที่มีประสิทธิภาพสูงสุด ขณะที่ ~ip~i-aminosalicylic acid ยับยั้ง การทำงานของเอ็นไซม์ได้น้อยที่สุด |
| บรรณานุกรม | : |
วนิดา นพพรพันธุ์ . (2542). การโคลนยีนและการแสดงออกของยีนสำหรับเอ็นไซม์ไดไฮโดรพเทอโรเอท ซินเทส จากเชื้อ ~iM. TUBERCULOSIS~i และ ~iM. LEPRAE~i.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. วนิดา นพพรพันธุ์ . 2542. "การโคลนยีนและการแสดงออกของยีนสำหรับเอ็นไซม์ไดไฮโดรพเทอโรเอท ซินเทส จากเชื้อ ~iM. TUBERCULOSIS~i และ ~iM. LEPRAE~i".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. วนิดา นพพรพันธุ์ . "การโคลนยีนและการแสดงออกของยีนสำหรับเอ็นไซม์ไดไฮโดรพเทอโรเอท ซินเทส จากเชื้อ ~iM. TUBERCULOSIS~i และ ~iM. LEPRAE~i."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2542. Print. วนิดา นพพรพันธุ์ . การโคลนยีนและการแสดงออกของยีนสำหรับเอ็นไซม์ไดไฮโดรพเทอโรเอท ซินเทส จากเชื้อ ~iM. TUBERCULOSIS~i และ ~iM. LEPRAE~i. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2542.
|
