???PmNOBII?เป็นไวรัสที่พบเป็นครั้งแรกโดยบังเอิญใน ห้องปฏิบัติการจากการทดลองเตรียมไวรัสหัวเหลือง?(YHV) เป็นจำนวนมาก?ตามรายงานของ?วงธีรทรัพย์และคณะ?ปี?2538? เนื่องจากการระบาดของโรคจุดขาวที่เกิดขึ้นในประเทศไทย ปลายปี?2537?และในหลาย?ๆ?ประเทศในทวีปเอเซีย?พบว่า ลักษณะทางพยาธิวิทยาและไวรัสที่พบในเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อ คล้างคลึงกับลักษณะที่พบจากการติดเชื้อในห้องปฏิบัติการ เป็นอย่างมากจึงได้มีการพัฒนาดีเด็นเอตรวจสอบ?(DNA probe) จากไวรัสในห้องปฏิบัติการ?เพื่อใช้ตรวจสอบความสัมพันธ์กับ ไว้รัสที่พบในภาคสนาม ??????ห้องสมุดยีนของไวรัส?PmNOBII?ได้ถูกสร้างขึ้นและ ได้ทำการคัดเลือกโคลน?2?ตัวที่มีขนาดชิ้น?insert ที่ เหมาะสมคือ?0.9?และ?4.2?กิโลเบส?ที่ให้ผลบวกชัดเจนเมื่อ ทำการไฮบริไดซ์กับจีโนมของไวรัส?PmNOBII ในการศึกษานี้ ชิ้น?DNA?ทั้ง?0.9?และ?4.2?กิโลเบส?ถูกนำมาใช้ตรวจสอบ โดยวิธี?In situ hybridization กับตัวอย่างกุ้งที่ติด เชื้อ?PmNOBII?ในห้องปฏิบัติการ?พบว่า?DNA?4.2?กิโลเบส ให้ผลบวกที่ชัดเจนกว่าชิ้น?0.9?กิโลเบส?ดังนั้นจึงใช้ชิ้น DNA 4.2?กิโลเบส?ในการตรวจสอบตัวอย่างกุ้งตระกูล Penaeus spp.?จากหลายบริเวณที่มีการระบาดของโรค?จากผล การทดลองแสดงให้เห็นว่าไวรัส?PmNOBII?หรือสายพันธ์ที่ ใกล้เคียงเป็นสาเหตุของโรคดวงขาวที่แพร่ระบาดในหลาย?ๆ? บริเวณทั้งประเทศไทย?และประเทศในเอเซีย ชิ้นดีเอ็นเอขนาด?4.2?กิโลเบส?และ?0.9?กิโลเบส ถูกนำมาหาลำดับเบสเพื่อออกแบบไพรเมอร์สำหรับเพิ่มจำนวน DNA?ของไวรัสจุดขาวซึ่งมีขนาด?294?และ?232?คู่เบส? ตามลำดับ?การตรวจสอบโดยวิธีนี้พบว่ามีความไวและความจำเพาะ สูง?สามารถตรวจพบ?DNA?ของไวรัสจุดขาวได้ในระดับ?0.1 pg และ?0.01 pg เมื่อตรวจจาก purified DNA?โดยใช้ชุดของ ไพร์เมอร์ที่ออกแบบจาดชิ้น?DNA ขนาด?4.2?(ชุด?A)?และ? 0.9?กิโลเบส?(ชุด?B)?ตามลำดับ ??????การตรวจสอบโดยวิธี?PCR ถูกนำมาใช้ในการตรวจหาไวรัส จากลูกกุ้งขนาดเล็ก?(PL5 PL15)?และกุ้งในบ่อเลี้ยง?ได้ พัฒนาวิธีการตรวจสอบโดยลดขั้นตอนการสกัด?DNA?การเตรียมตัว อย่างโดยไม่มีสารละลาย?NaOH และ?SDS?ในขั้นตอนการบด ตัวอย่างก่อนนำไปทำ?PCR?กับไพร์เมอร์ชุด?A?และ?B?พบว่า สามารถตรวจพบ?DNA?ไวรัสได้ในระดับ?10 pg?และ?1 pg? ตามลำดับ?การสุ่ม?199?ตัวอย่างจากภาคสนามมาตรวจ?พบว่า ตัอย่างที่มีการติดเชื้อเพียง?1?ตัวอย่าง?การเพิ่มสาร ละลาย?NaOH 0.025 N และ SDS 0.0125% ในขั้นตอนการบด ตัวอย่างก่อนนำไปทำ?PCR?กับไพร์เมอร์ชุด?B พบว่า?สามารถ ตรวจพบ?DNA?ไวรัสได้ในระดับต่ำกว่า?คือ?0.01 pg 76 ตัวอย่างจาก?199?ถูกนำมาตรวจซ้ำโดยวิธีการอันหลังนี้? พบว่ามีการติดเชื้อเพิ่มขึ้นเป็น?13?ตัวอย่าง ??????การตรวจหาไวรัสจากกุ้งขนาดใหญ่ทำได้โดยการเก็บ hemolymph จากกุ้งใน?70% เอธานอล?ก่อนนำไปทำ?PCR โดยใช้ ไพร์เมอร์จากทั้งชุด?A และ?B สามารถตรวจพบ?DNA ไวรัสได้ ในระดับเดียวกันคือ?0.1 pg?การตรวจสอบตัวอย่าง?hemolymph จากภาคสนามพบ?4?ตัวอย่าง?แสดงการติดเชื้อจากทั้งหมด? 7?ตัวอย่าง