ทำการสร้างรีคอมบิเนนต์พลาสมิด pTrcHis/(+,D)NS1 ที่มีส่วนของ ชิ้นยีน NS1 ขนาดเล็กที่มีเฉพาะส่วนปลายอะมิโนขนาด 814 คู่เบส (ตัดยีน ขนาด 214 คู่เบสที่ปลายคาร์บอกซีออก) ของไวรัสเด็งกี่ซีโรทัยป์ 2 สาย พันธุ์ New Guinea C (NGC) ในเวคเตอร์ pTrcHis ซึ่งเป็นเวคเตอร์ ที่ใช้ในการแสดงออกใน ~E.Coli~i เมื่อมีการเหนี่ยวนำด้วยสารละลาย IPTG เชื้อ ~E.coli~i ที่มีพลาสมิด pTrcHis/(+,D)NS1 สามารถผลิตรี คอมบิแนนต์โปรตีน 6H-(+,D)NS1 ที่มีกรดอะมิโนต่อโปรตีน NS1 จำนวน 271 ตัว และมีกรดอะมิโนฮีสติดีน 6 ตัวเป็นเปปไทด์พาหะอยู่ที่ปลายอะมิโน ซึ่ง ยังคงแสดงออกอยู่ในรูปที่ไม่ละลายน้ำ การแยกโปรตีน 6H-(+,D)NS1 ให้ บริสุทธิ์ทำได้โดยวิธี Immobilized Metal Affinity Chromatography (IMAC) ในสภาวะที่โปรตีนถูกทำลายสภาพธรรมชาติ (denaturing condition) โปรตีนบริสุทธิ์ที่ได้จะมีขนาดประมาณ 35 กิโลดาลตันเพียง ขนาดเดียวเท่านั้นจากการวิเคราะห์ด้วย SDS-PAGE และ Western blot ถึงแม้จะพบว่ามีโปรตีนขนาดเล็กอื่นๆ ที่ทำปฏิกิริยาได้กับโมโนโคลนอล แอนติบอดีที่จำเพาะกับโปรตีน NS1 (1B2) ก่อนการทำให้บริสุทธิ์ก็ตาม จากการคืนสภาพธรรมชาติ (refolding) ของโปรตีนบริสุทธิ์ 6H- (+,D)NS1 ทั้ง 3 วิธี พบว่าการเพิ่มพีเอช พร้อมกับการเติมสารละลาย DTT ก่อนการไอะไลซ์โปรตีนที่เสียสภาพธรรมชาติในไกลซีนบัฟเฟอร์ เป็น วิธีที่ดีที่สุดในการคืนสภาพธรรมชาติของโปรตีน เพราะสามารถกำจัดสาร ดีแนเจอร์แรนท์ทั้งหมดออกจากสารละลายโปรตีนได้ แต่จะต้องใช้โปรตีน เริ่มต้นที่มีความเข้มข้นต่ำ(ไม่เกิน 0.2 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร) ในขณะ ที่วิธีการไดอะไลซีสในบัฟเฟอร์ที่มียูเรียน้อยไปจนถึงไม่มียูเรียอยู่เลย พบว่าโปรตีน 6H-(+,D)NS1 ยังคงต้องการยูเรียอย่างน้อย 2.5 โมลาร์ เพื่อรักษาสภาพการละลาย ส่วนวิธีการเจือจางโปรตีนบริสุทธิ์ 6H-(+,D)NS1 ลงในบัฟเฟอร์ที่มี L-arginine ร่วมกับ oxidized/reduced gluta- thiones เป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพน้อยกว่าวิธีอื่นๆ เพราะโปรตีนส่วนใหญ่ ตกตะกอนเกือบทั้งหมดระหว่างการ refolding โปรตีนบริสุทธิ์ 6H-(+,D) NS1 สามารถทำปฏิกิริยากับโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อโปรตีน NS1 และซีรั่มรวมของผุ้ป่วยไข้เลือดออก ดังนั้นรีคอมบิแนนต์โปรตีน 6H-(+,D) NS1 จึงน่าจะมีศักยภาพที่จะใช้เป็นแอนติเจนในการพัฒนาชุดตรวจวินิจฉัย ไข้เลือดออกต่อไป