| ชื่อเรื่อง | : | การคัดเลือกหาจีน PHA synthase ของเชื้อ Ralstonia solanacearum โดยเทคนิค ทางอณูชีววิทยา |
| นักวิจัย | : | จิรภา เพชร์สม |
| คำค้น | : | - |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2544 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=33868 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | โพลีไฮดรอกซีอัลคาโนเอท เป็นโพลิเมอร์ที่มีการสะสมไว้ภายในเซลล์ โดยใช้เป็น แหล่งคาร์บอนและพลังงาน ซึ่งสามารถผลิตได้ในแบคทีเรียหลายชนิดที่สภาวะการจำกัดสาร อาหาร เนื่องจากโพลิเมอร์ดังกล่าวมีคุณสมบัติเป็นพลาสติกที่สามารถย่อยสลายได้ในธรรมชาติ จึงได้รับความสนใจจากภาคอุตสาหกรรมในการผลิตเป็นผลิตภัณฑ์เทคโนโลยีชีวภาพ ~iRalstonia solanacearum~i เป็นแบคทีเรียที่สามารถก่อให้เกิดโรคในพืชตระกูล ~iSolanaceae~i ซึ่งได้แก่ มะเขือเทศ, มันฝรั่ง และยาสูบ ซึ่งสามารถผลิตโพลิเมอร์สะสม ไว้ภายในเซลล์เพื่อเป็นแหล่งพลังงานสะสมได้ การโคลนจีน PHA synthase ของเชื้อ ~iR. solanacearum~i ATCC 11696 โดยการตัดจีโนมด้วยเอนไซม์ ~iPst~iI และทำการ เชื่อมต่อชิ้นดีเอ็นเอร่วมกับดีเอ็นเอพาหะ (pBluescriptII KS+) และนำเข้าสู่ ~iEscherichia coli~i (XL1-Blue) เพื่อสร้างเป็นห้องสมุดดีเอ็นเอ การตรวจหาจีนในห้อง สมุดทำได้โดยใช้ตัวติดตามสองชนิดคือ ชิ้นดีเอ็นเอที่ได้จากการใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอเรส ในการเพิ่มจำนวนชิ้นดีเอ็นเอบริเวณจีน PHA synthase ของเชื้อ ~iR. eutropha~i ATCC 17699 และตัวตรวจติดตามที่สองคือชิ้นดีเอ็นเอคัดขนาดที่ได้จากการตัดโครโมโซม ของเชื้อ ~iR. eutropha~i ATCC 17699 ด้วยเอนไซม์ ~iPst~iI ผลการติดตามพบว่ามี 21 โคลนให้ผลบวกกับตัวตรวจติดตาม โดยมี 7 โคลนคือ pKS-A33, pKS-A79, pKS-D20, pKS-I94, pKS-M9, pKS-P113 และ pKS-R22 ที่ชิ้นดีเอ็นเอเป้าหมายสามารถจับกับตัวติดตาม ที่ได้จากชิ้นดีเอ็นเอคัดขนาดของเชื้อ ~iR. eutropha~i และมีเพียงหนึ่งโคลน (pKS-A79) ที่มีชิ้นดีเอ็นเอเป้าหมายสามารถจับชิ้นดีเอ็นเอที่ได้จากปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอเรส โคลน pKS-D20 เป็นอีกหนึ่งโคลนที่คัดเลือกจากห้องสมุดดีเอ็นเอโดยใช้ชิ้นดีเอ็นเอคัดขนาดที่ได้ จากการตัดโครโมโซมของเชื้อ ~iR. eutropha~i ทั้ง pKS-A79 และ pKS-D20 เมื่อนำไป หาลำดับนิวคลีโอไทด์โดยใช้ทั้ง forward และ reverse primer จากนั้นทำการวิเคราะห์ด้วย Blast จากผลการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ด้าน reverse primer ของ pKS-A79 โดย Blastn พบว่ามีความคล้ายกับจีโนมของ ~iMusmusculus~i และ ~iEscherichia coli~i K-12 แต่ลำดับนิวคลิโอไทด์ด้าน forward primer ไม่มีส่วนคล้ายคลึงอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ กับนิวคลิโอไทด์ที่มีอยู่ในฐานข้อมูล เมื่อทำการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ของโคลน pKS-D20 ในส่วนของ forward และ reverse primer โดย Blastn และ tBlastx พบว่ามีความ คล้ายกับ 16S ribosomal RNA gene ของเชื้อ ~iB. solanacearum~i ATCC 10696, ~iP. syzygii~i ATCC 49543T และ ~iP. solanacearum~i ATCC 11696 จากการหาลำดับ นิวคลิโอไทด์ทั้งจีโนมของ ~iR. solanacearum~i GMI1000 เสร็จสมบูรณ์เมื่อต้นปี 2545 เราจึงสามารถออกแบบ primer เพื่อเพิ่มจำนวนชิ้นดีเอ็นเอที่คาดว่าเป็นยีน PHA synthase ของ ~iR. solanacearum~i ATCC 11696 โดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอเรส โดยมีขนาด 1.8 Kb ในอนาคตจะได้ทำการโคลนชิ้นดังกล่าวและใช้เป็นแนวทางในการติดตามยีนทั้งหมดที่ใช้ ในการสร้าง PHA ได้ต่อไป |
| บรรณานุกรม | : |
จิรภา เพชร์สม . (2544). การคัดเลือกหาจีน PHA synthase ของเชื้อ Ralstonia solanacearum โดยเทคนิค ทางอณูชีววิทยา.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. จิรภา เพชร์สม . 2544. "การคัดเลือกหาจีน PHA synthase ของเชื้อ Ralstonia solanacearum โดยเทคนิค ทางอณูชีววิทยา".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. จิรภา เพชร์สม . "การคัดเลือกหาจีน PHA synthase ของเชื้อ Ralstonia solanacearum โดยเทคนิค ทางอณูชีววิทยา."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2544. Print. จิรภา เพชร์สม . การคัดเลือกหาจีน PHA synthase ของเชื้อ Ralstonia solanacearum โดยเทคนิค ทางอณูชีววิทยา. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2544.
|
