| ชื่อเรื่อง | : | การแยกและศึกษาคุณสมบัติบางประการของ Exotoxin ที่ผลิตโดยเชื้อ ~iBurkholderia pseudomallei~i |
| นักวิจัย | : | วัลลภ เรืองเดชชัยสกุล |
| คำค้น | : | - |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2543 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=33133 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | โรคเมลิออยโดสิสเป็นโรคที่เกิดจากเชื้อ ~iBurkholderia pseudomallei~i ระบาด บริเวณเอเชียตะวันออกเฉียงใต้และภาคเหนือของออสเตรเลีย จะระบาดมากในฤดูฝน exotoxin ที่ผลิตจากเชื้อ ~iB. pseudomallei~I พบได้ใน culture filtrated จากเชื้อที่เป็น pathogen (Ara(-)) และ non-pathogen (Ara(+)) เมื่อนำมาศึกษา SDS-PAGE pattern พบว่าลักษณะไม่แตกต่างกัน ในการแยกท็อกซิน culture filtrated จะถูกลดปริมาตรด้วย เครื่อง ultrafiltration ที่มีเมมเบรน cut-off เท่ากับ 10 kDa โปรตีนจาก culture filtrated ที่มีขนาดน้ำหนักโมเลกุลมากกว่า 10kDa ถูกแยกด้วยวิธี preparative isoelectric focusing (IEF) ในช่วง pH ระหว่าง 3.5-5.0 แต่โปรตีนจาก fraction No. 15-20 ยังไม่ แยกจากกัน ดังนั้นจึงถูกแยกอีกครั้งในช่วง pH ระหว่าง 5.0-6.0 และทำการวิเคราะห์ โปรตีนด้วยวิธี SDS-PAGE พบว่ามีโปรตีนหลักอยู่ 4 ตัว คือ โปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุล เท่ากับ 42, 38, 30 และ 22.5 kDa ตามลำดับ โดยโปรตีนขนาด 30 kDa ยังมีการปนของโปรตีน ขนาด 42 kDa นอกจากนั้นเปปไทด์ จาก culture filtrated ที่ผ่านเมมเบรนถูกแยกด้วย Sephadex G-25 column พบว่าเป็นเปป ไทด์ที่มีขนาดน้ำหนักโมเลกุลเท่ากับ 3.4 kDa เมื่อทำการแยกด้วยวิธี Tricine SDS-PAGE ในการศึกษา toxicity ของ crude toxins จากเชื้อที่เป็น pathogen คือ H777 และ H639 กับ non-pathogen คือ Ve5 ถูกทดสอบในหนู mice ด้วยวิธี LD(,50) bioassay มีค่า LD(,50) 121.7, 219.9 และ 125.3 ไมโครกรัมโปรตีน ตามลำดับ หลังจากนำ crude toxin จาก H777 isolate มาทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ และนำโปรตีนหลักทั้ง 4 ตัวมาศึกษา cytotoxic activity ด้วยวิธี cell proliferation assay พบว่ามี CLT(,50) เท่ากับ 7.5, 12.2, 7 และ 10.1 ไมโครกรัมตามลำดับ โดยโปรตีนขนาด 42 กับ 30 kDa มีค่า CLT(,50) สูง แต่ 42 kDa exotoxin ยังไม่มีการรายงานมาก่อน และ 30 kDa exotoxin นั่นคือสารพิษที่ได้ รายงานโดย Ismail และคณะในปี 1987 ในการศึกษา toxicity ของเปปไทด์ขนาด 3.4 kDa จากเชื้อสาม isolates คือ H777, H639 และ Ve5 โดยทำการศึกษา cytotoxic activity เปปไทด์ ขนาด 3.4 KDa จากทั้งสาม isolates มีค่า CLT(,50) เท่ากับ 6.4, 1.3 และ 1.1 ไมโครกรัม ตามลำดับ เมื่อนำเปปไทด์ขนาด 3.4 kDa ที่ผลิตจากเชื้อ H639 isolate มาทดสอบ toxicity ในหนู mice พบว่าไมมี lethal effect นอกจากนี้เมื่อศึกษาคุณสมบัติบางประการของ 42 kDa exotoxin พบว่าสามารถทำปฏิกิริยากับ pooled antiserum ของผู้ป่วยโรคเมลิออยโดสิส และ rabbit antiserum ต่อ 42 kDa exotoxin มี collagenase activity และมี isoelectric point (pI) เท่ากับ 4.55 เมื่อนำเอาลำดับกรดอะมิโนด้านปลาย N-termanal ทั้งหมด 15 ลำดับ มาหาความเหมือนกับโปรตีนตัวอื่นโดยใช้โปรแกรม Blastp Blastn tBlastn และ FASTA3 พบว่า ไม่มีความเหมือนกับโปรตีนตัวอื่น เมื่อเปรียบเทียบ toxicity ของ 42 30 และ 3.4 kDa exotoxin ที่ผลิตจากเชื้อ ~iB. pseudomallei~i กับ exotoxin จากเชื้อแบคทีเรียชนิดอื่น เช่น ~iPseudomonas aeruginosa~i พบว่า exotoxins จาก ~iB. pseudomallei~i ว่ามีค่าต่ำ ดังนั้น exotoxins จากเชื้อ ~ib. pseudomallei~i อาจเป็นเพียงปัจจัยร่วมของการเกิดพยาธิสภาพของโรค เมลิออยโดสิส โดยปัจจัยที่ทำให้เกิดอาการรุนแรงในโรคเมลิออยโดสิสจึงอาจจะมาจาก ตัวเชื้อเองหรือจากการทำงานร่วมกันของ extracellular products ที่ผลิตจาก ~iB. pseudomallei~i |
| บรรณานุกรม | : |
วัลลภ เรืองเดชชัยสกุล . (2543). การแยกและศึกษาคุณสมบัติบางประการของ Exotoxin ที่ผลิตโดยเชื้อ ~iBurkholderia pseudomallei~i.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. วัลลภ เรืองเดชชัยสกุล . 2543. "การแยกและศึกษาคุณสมบัติบางประการของ Exotoxin ที่ผลิตโดยเชื้อ ~iBurkholderia pseudomallei~i".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. วัลลภ เรืองเดชชัยสกุล . "การแยกและศึกษาคุณสมบัติบางประการของ Exotoxin ที่ผลิตโดยเชื้อ ~iBurkholderia pseudomallei~i."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2543. Print. วัลลภ เรืองเดชชัยสกุล . การแยกและศึกษาคุณสมบัติบางประการของ Exotoxin ที่ผลิตโดยเชื้อ ~iBurkholderia pseudomallei~i. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2543.
|
