| ชื่อเรื่อง | : | ไวรัสโรคจู๋ของข้าว:การโคลนยีนและจำแนกโปรตีนองค์ประกอบอนุภาคไวรัส |
| นักวิจัย | : | เกษม สุนทราจารย์ |
| คำค้น | : | - |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2537 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=26048 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ไวรัสโรคจู๋ของข้าว (RRSV) ที่เตรียมค่อนข้างบริสุทธิ์ เมื่อนำ มาตรวจดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนโดยการย้อนอนุภาคด้วย 2% ammonium molybdate พบว่าอนุภาคไวรัสเป็นรูปทรงกลม ขนาดเส้นผ่า ศูนย์กลางประมาณ 68 mm spike มีลักษณะของฐานที่กว้างกว่าส่วนสูง โปรตีนองค์ประกอบของเชื้อ RRSV จากการแยกด้วยกระแสไฟฟ้าใน 10% SDS polyacrylamide gel พบว่ามีอยู่ 5 ชนิดขนาดน้ำหนักโมเลกุล 120,000 daltons (120 Kd), 100 Kd, 71 Kd, 51 Kd และ 35 Kd ผลจากการทำ Western blotting โดยการทำปฏิกิริยากับแอนดิบอดีต่อ เชื้อไวรัส RRSV พบว่าโปรตีนทุกชนิดสามารถเกิดปฏิกิริยาได้ จากการเตรียม แอนติบอดีต่อโปรตีนแต่ละชนิดในกระต่าย แล้วนำมาทดสอบด้วย Western blotting พบว่าโปรตีนแต่ละชนิดมีความแตกต่างกัน ซึ่งจากผลการทดลองนี้ แสดงว่าโปรตีนทั้ง 5 ชนิดเป็น ส่วนประกอบของอนุภาคไวรัส RNA สายคู่ (dsRNA) ของเชื้อ RRSV ที่สกัดได้จากข้าวที่เป็นโรคจู๋ เมื่อนำมาแยกใน 1% agarose gel พบว่ามี 5 แถบ (band) มีขนาด ประมาณ 4102, 3006, 2178, 1972 และ 1245 คู่เบส จีโนมทั้งหมดและ เฉพาะขนาด 1245 คู่เบส นำมาใช้เป็นต้นแบบในการสังเคราะห์ complementary DNA (cDNA) นำ cDNA ที่สังเคราะห์ได้มาเชื่อมต่อกับ EcoRI adaptor แล้วนำไปเชื่อมต่อกับพลาสมิดพาหะ pUC118 แล้วทำการ transform เข้าสู่เชื้อ E.coli JPA101 โดยวิธี electroporation คัด เลือกโคโลนีที่มีสีขาว บนอาหาร LA ที่ผสม ampicillin 100 ppm กับ IPTG และ X-Gal ได้จำนวน 406 โคลน เป็นโคลนที่มีการสังเคราะห์มา จากจีโนมขนาด 1245 คู่เบส จำนวน 103 โคลน เมื่อตรวจสอบ fusion protein ด้วย IgG ต่ออนุภาคที่สมบูรณ์ของไวรัส ไม่พบว่ามีโคลนใดที่มีการ แสดงออกของยีนโปรตีนองค์ประกอบไวรัส ทั้งนี้อาจเป็นเพราะว่า cDNA ที่ สังเคราะห์ได้ส่วนใหญ่มีขนาดสั้นกว่า 1000 คู่เบส และอยู่ต่าง reading frame การที่สังเคราะห์ cDNA ได้สายไม่เต็ม (full length) อาจเป็น เพราะ dsRNA มีโครงสร้างทุติยภูมิ (secondary structure) ที่ทำให้ ยากต่อการ denature ในปฏิกิริยาการสังเคราะห์ cDNA การวิเคราะห์ หาลำดับการเรียงตัวของกรดอะมิโน เปรียบเทียบกับลำดับเบส พบว่าโปรตีน 35 Kd มีการแปลรหัสมาจากจีโนม dsRNA ชิ้นส่วนที่ 9 |
| บรรณานุกรม | : |
เกษม สุนทราจารย์ . (2537). ไวรัสโรคจู๋ของข้าว:การโคลนยีนและจำแนกโปรตีนองค์ประกอบอนุภาคไวรัส.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. เกษม สุนทราจารย์ . 2537. "ไวรัสโรคจู๋ของข้าว:การโคลนยีนและจำแนกโปรตีนองค์ประกอบอนุภาคไวรัส".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. เกษม สุนทราจารย์ . "ไวรัสโรคจู๋ของข้าว:การโคลนยีนและจำแนกโปรตีนองค์ประกอบอนุภาคไวรัส."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2537. Print. เกษม สุนทราจารย์ . ไวรัสโรคจู๋ของข้าว:การโคลนยีนและจำแนกโปรตีนองค์ประกอบอนุภาคไวรัส. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2537.
|
