แบคทีเรียทนความร้อนสายพันธุ์ ทีแอลเอส33 เป็นแบคทีเรียที่ผลิตโปรติเอสที่ส่งออก นอกเซลล์ ซึ่งแยกได้จากน้ำพุร้อนเทพพนม จังหวัดเชียงใหม่ แบคทีเรียนี้สามารถเจริญเติบโต ได้ดีและผลิตเอนไซม์ได้ปริมาณสูงเมื่อเลี้ยงในอาหารเหลวที่ประกอบด้วย 0.1% w/v yeast extract และ 0.25% w/v skim milk ใน 80% v/v base mixture ที่อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 48 ชั่วโมง โปรติเอสสามารถทำงานได้ดีในช่วงพีเอชและอุณหภูมิ ที่เหมาะสมคือ 5.0-8.0 และ 70-80 องศาเซลเซียส ตามลำดับ และเสถียรในสารละลาย บัฟเฟอร์พีเอช 7.0 เมื่อบ่มที่ 75 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 ชั่วโมง นอกจากนี้ CaCl(,2) จะช่วยทำให้ความคงทนต่อความร้อนของทั้งสารละลายเอนไซม์ที่มีและไม่มีสารประกอบที่ไวต่อ หมู่ไธออลเพิ่มขึ้น โปรติเอสสามารถคงทนต่อความร้อนได้ดีในตัวทำละลายอินทรีย์ได้แก่ Diisopropyl ether, Cyclohexane และ Hexane และโปรติเอสสามารถย่อยสลายโปรตีน ได้หลายชนิดดังนี้ casein, lysozyme, skim milk, ovalbumin, hemoglobin, BSA, soybean, azocasein, creatinine และ gelatin นอกจากนี้แอคติวิตีของโปรติเอสจะหมด ไปเมื่อมี 40 mM EDTA อยู่ในสารละลายซึ่งทำให้จัดประเภทเอนไซม์เป็นพวกนิวทรัลเมตาโลโปรติเอส และการเติมแคทไอออนที่มีความเข้มข้นต่ำ (< 10mM) ได้แก่ Mg(2+), Ca(2+) และ K(+) จะช่วยทำให้แอคติวิตีของโปรติเอสเพิ่มขึ้นโดยเฉพาะการเติม 1 mM Zn(2+) นอกจากจะทำให้ แอคติวิตีเพิ่มสูงขึ้นอย่างชัดเจนแล้วยังช่วยทำให้แอคติวิตีของ apoenzyme กลับคืนมา 64.94% จึงสรุปได้ว่าโลหะที่อยู่ในโมเลกุลของโปรติเอสคือ Zn(2+) โปรติเอสได้ถูกทำให้เข้มข้นและ บริสุทธิ์ขึ้นบางส่วน โดยการทำ freeze-dry, ไดอะไลซีล, โครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออน และเจลฟิลเตรชัน ในการตรวจหามวลโมเลกุลของโปรติเอสโดยวิธีเจลฟิลเตรชัน พบว่ามีค่าประมาณ 21,843 ดาลตัน และเมื่อนำมาศึกษาลักษณะเฉพาะต่างๆ พบว่าจะใกล้เคียงกับผลการศึกษาโดยใช้ crude enzyme คือสามารถทำงานได้ดีในช่วงพีเอชและอุณหภูมิที่เหมาะสมคือ 5.0-8.0 และ 70-80 องศาเซลเซียส ตามลำดับ และจะเสถียรที่อุณหภูมิ 70 องศาเซลเซียส โปรติเอสสามารถ คงทนต่อความร้อนได้ดีเมื่ออยู่ในตัวทำละลายอินทรีย์ได้แก่ Diisopropyl ether, Cyclohexane และ Hexane ส่วนการศึกษาผลของตัวยับยั้งและแคทไอออนพบว่า EDTA ในความเข้มข้นต่ำเพียง 5 mM ก็สามารถยับยั้งการทำงานของโปรติเอสได้เกือบสมบูรณ์ และการเติมแคทไอออนที่มีความ เข้มข้นต่ำ (1 mM) ได้แก่ Mg(2+), Ca(2+) และ K(+) จะทำให้แอคติวิตีของโปรติเอส เพิ่มขึ้น โดยเฉพาะการเติม Zn(2+) นอกจากนี้ยังพบว่าโลหะที่เป็นส่วนประกอบในโครงสร้าง โมเลกุลของโปรติเอสที่แยกบริสุทธิ์บางส่วนนี้คือ Zn(2+) และโปรติเอสนี้จะมีค่า K(,m) และ V(,max) เมื่อใช้ azocasein เป็นสับสเตรทเท่ากับ 0.14%w/v และ 0.108 U/ml/min ตามลำดับ