| ชื่อเรื่อง | : | การโคลน และ การแสดงออกของ ~imap30~i จากมะระขี้นก ~iMomordica charantia~i Linn. ใน ~iEscherichia coli~i |
| นักวิจัย | : | กัญจน์ ศิลป์ประสิทธิ์ |
| คำค้น | : | MAP30 , CLONING , TOPOISOMERASE |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2547 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1082547000802 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | MAP30 เป็นโปรตีนขนาด 30 กิโลดาลตันที่พบในมะระ (~iMomordica charantia~i)จากการศึกษาที่ผ่านมาพบว่า MAP30 มีฤทธิ์ยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีนและมีสมบัติคล้ายtopoisomerase ซึ่งสมบัติทั้งสองสามารถยับยั้งวงจรชีวิตของไวรัสได้หลายขั้นตอน มะระขี้นกเป็นมะระสายพันธุ์หนึ่งที่พบได้ทั่วไปในประเทศไทย การศึกษานี้ได้ทำการเพิ่มปริมาณยีนของโปรตีน MAP30 จากจีโนมิกดีเอ็นเอของมะระขี้นกโดยการทำ Polymerase chain Reactionด้วยไพร์เมอร์ที่จำเพาะ จากนั้นทำการโคลนและหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของ ~imap30i ยีน จากการเปรียบเทียบลำดับนิวคลีโอไทด์กับยีนของ ~imap30~i จากแหล่งอื่นในฐานข้อมูลพบว่ามีความคล้ายคลึงกันมาก (มี 2-8 นิวคลีโอไทด์ และ 1-3 กรดอะมิโนที่ต่างกัน) เมื่อนำ ~imap30~iยีนที่ได้ไป subclone เข้าสู่เวคเตอร์ pET19b และเหนี่ยวนำให้เกิดการแสดงออกใน ~iEschericiacoli~i Rosetta DE3 (pLysS) พบว่ารีคอมบิแนนท์ MAP30 อยู่ในรูป soluble protein และinclusion bodies การนำ inclusion bodies ไปละลายด้วย 8 โมลาร์ ยูเรีย, refold และทำโปรตีนให้บริสุทธิ์ด้วย CM-Sephadex C-50 และ phosphocellulose P11 คอลัมน์โครมาโทกราฟีพบว่าได้ inclusion bodies ที่บริสุทธิ์แต่ไม่มีแอคติวิตี ต่อมาจึงนำโปรตีนจากส่วนที่เป็นสารละลายไปทำให้บริสุทธิ์ด้วยการตกตะกอนใน 30-60 เปอร์เซนต์ แอมโมเนียมซัลเฟตอิ่มตัวและCM-Sephadex C-50 คอลัมน์โครมาโทกราฟี สามารถแยกสารละลายโปรตีนได้สองส่วนคือ CmI และ CmIIจากการติดตามโปรตีน MAP30 พบว่าสารละลายโปรตีน CmII มี topoisomerase activity จึงนำสารละลายโปรตีนดังกล่าวไปทำโปรตีนให้บริสุทธิ์ยิ่งขึ้นด้วย phosphocellulose P11 คอลัมน์โครมาโทรกราฟีซึ่งตรวจพบ topoisomerase activity ในสารละลายโปรตีนที่เกาะคอลัมน์ เมื่อตรวจความบริสุทธิ์ด้วย SDS-PAGE พบแถบโปรตีนเพียงหนึ่งแถบขนาดประมาณ 30 kDa จากนั้นทำการยืนยันความเป็นMAP30 โปรตีน โดยหาลำดับเกรดอะมิโน 20 ตัวแรกด้านปลาย N-terminal จากการหาขนาดโดยใช้โปรแกรมคำนวน โปรตีนที่ได้มีขนาด 29.62 kDa การศึกษา topoisomerase activity ของโปรตีนบริสุทธิ์พบว่าที่ความเข้มข้น 0.85 ไมโครโมลาร์ เป็นความเข้มข้นที่น้อยที่สุดที่แสดงแอคติวิตี |
| บรรณานุกรม | : |
กัญจน์ ศิลป์ประสิทธิ์ . (2547). การโคลน และ การแสดงออกของ ~imap30~i จากมะระขี้นก ~iMomordica charantia~i Linn. ใน ~iEscherichia coli~i.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. กัญจน์ ศิลป์ประสิทธิ์ . 2547. "การโคลน และ การแสดงออกของ ~imap30~i จากมะระขี้นก ~iMomordica charantia~i Linn. ใน ~iEscherichia coli~i".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. กัญจน์ ศิลป์ประสิทธิ์ . "การโคลน และ การแสดงออกของ ~imap30~i จากมะระขี้นก ~iMomordica charantia~i Linn. ใน ~iEscherichia coli~i."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2547. Print. กัญจน์ ศิลป์ประสิทธิ์ . การโคลน และ การแสดงออกของ ~imap30~i จากมะระขี้นก ~iMomordica charantia~i Linn. ใน ~iEscherichia coli~i. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2547.
|
