เมื่อโคลนโครโมโซมอลดีเอ็นเอจาก bacillussubtilis TISTR25 ซึ่งเป็นเชื้อที่แยกได้จากดินในประเทศไทยสามารถผลิตทั้งนิวทรัลและแอลคาไลน์โปรตีเอสเข้าสู่ Escherichia coli HB101 โดยอาศัยพาหะดีเอ็นเอpGEX-2T ของระบบ GST Gene Fusion ทำให้เซลล์เจ้าบ้านสามารถผลิตเอนไซม์มีโปรตีเอสที่อยู่ในรูป fusion proteinทำการคัดเลือกทรานสฟอร์แมนท์ด้วยการเลี้ยงบนจานอาหารที่มีนมผงพร่องไขมัน IPTG และยาแอมพิซิลลิน การศึกษาด้วยวิธีโคโลนีไฮบริไดเซชันกับดีเอ็นเอติดตามของยีนนิวทรัลโปรตีเอสที่ติดฉลากสารกัมมันตภาพรังสี มีสัญญาณการไฮบริไดซ์ของยีนนิวทรัลโปรตีเอส เมื่อเลี้ยงทรานสฟอร์แมนท์หมายเลข 97ในอาหารสูตรพื้นฐานที่มีซัคซิเนตเป็นแหล่งต้นตอคาร์บอนเป็นเวลา 24 ชั่วโมง พบว่ามีแอคติวิตีจำเพาะสูงสุด 305.08 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีน ในภาวะ pH 8.5 และการศึกษาผลของสารยับยั้งต่อความสามารถในการทำงานของโปรตีเอสพบว่าเอนไซม์นี้ถูกยับยั้งการทำงานอย่างสมบูรณ์ในภาวะที่มี EDTA เข้มข้น5 มิลลิโมลาร์แต่ยังคงมีแอคติวิตีอยู่เมื่ออยู่ในภาวะที่มีPMSF เข้มข้น 1 มิลลิโมลาร์ เป็นการยืนยันว่าทรานสฟอร์แมนท์ผลิตโปรตีเอสชนิดนิวทรัลโปรตีเอส การทำให้ fusion proteinบริสุทธิ์ สามารถทำได้ภายใต้ภาวะที่ไม่รุนแรงภายใน คอลัมน์แอฟฟินิตีโครมาโตกราฟีที่มีเจล glutathione Sepharose 4Bแล้วแยก fusion protein ด้วยทรอมบิน ทำให้ได้โปรตีเอสอิสระที่มีค่าแอคติวิตีจำเพาะสูงถึง 1,289.18 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีน ที่ pH 8.5 ซึ่งสูงกว่าก่อนทำให้บริสุทธิ์ถึง4.23 เท่า และเมื่อทำ SDS-PAGE พบว่าโปรตีเอสอิสระมีน้ำหนักประมาณ 44,000 ดาลตัน