Bacillus subtilis TISTR 25 เป็นเชื้อที่แยกได้จากดินในประเทศ ไทย สามารถผลิตได้ทั้งนิวทรัลโปรตีเอสและแอลคาไลน์โปรตีเอส ในการโคลนยีนที่สร้างโปรตีเอสจาก Bacillus subtilis TISTR 25 ทำโดยย่อยดีเอ็นเอของโครโมโซมที่สกัดจากเชื้อนี้ ด้วยเรสทริกชันเอนไซม์ Sau3AI แบบไม่สมบรูณ์ (partial digestion) แล้วทำการเชื่อมต่อกับดีเอ็นเอพาหะ pUC18ซึ่งย่อยด้วย BamHI จากนั้นทำการนเคลื่อนย้ายรคอมบิแนนท์พลาสมิดนี้เข้าสู่เซลล์เจ้าเรือนคือ Escherichia coli JMl09 ทำการตรวจหาเซลล์เจ้าเรือนที่ได้รับเอารีคอมบิแนท์พลาสมิดที่มียีนโปรตีเอส โดยเลือกจากโคโลนีที่ให้วงใสรอบ ๆ โคโลนีบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีนมพร่องไขมัน (skim milk plate)ได้รีคอมบิแนนท์พลาสมิดที่มียีนโปรตีเอสโดยให้ชื่อว่า pCSBC14 มีขนาดของขึ้นดีเอ็นเอจาก Bacillus subtilis TISTR 25 ประมาณ 4 กิโลเบส ทำการศึกษาแผนที่เรสทริกชันของ pCSBC14 และทำการวัดแอคติวิตีของเอนไซม์โปรตีเอสในการไฮโดรไลส์เคซีน โดยการทดลองได้ดัดแปลงจากวิธีที่เสนอโดย เกษม (2536)พบว่ามีทั้งแอคติวิตีของแอลคาไลน์โปรตีเอสและนิวทรัลโปรตีเอส จึงทำการตรวจสอบชนิดของยีนโปรตีเอสที่ได้ด้วยเทคนิคไฮบริไดซ์เซชัน โดยใช้ดีเอ็นเอติดตามที่มี ยีนแอลคาไลน์โปรตีเอส คือ พลาสมิด pKWZ และดีเอ็นเอติดตามที่มียีนนิวทรัลโปรตี เอส คือ พลาสมิด pNC3 จากการวิเคราะห์สัญญาณการไฮบริไดซ์พบว่ายีนโปรตีนเอสที่ได้นั้นมีความคล้ายคลึงกับยีนนิวทรัลโปรตีเอส และยีนอลคาไลน์โปรตีเอส