| ชื่อเรื่อง | : | การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli |
| นักวิจัย | : | รัชนี ไสยประจง |
| คำค้น | : | GLUCOSE ISOMERASE , GENE CLONING , Streptomyces |
| หน่วยงาน | : | ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย |
| ผู้ร่วมงาน | : | - |
| ปีพิมพ์ | : | 2536 |
| อ้างอิง | : | http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1082536000126 |
| ที่มา | : | - |
| ความเชี่ยวชาญ | : | - |
| ความสัมพันธ์ | : | - |
| ขอบเขตของเนื้อหา | : | - |
| บทคัดย่อ/คำอธิบาย | : | ได้ทำการโคลนยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจาก Streptomycessp.190-1 ใน Escherichia coli HB101 โดยใช้พลาสมิด pUC18 หรือpUC19 เป็นพลาสมิดพาหะจากการคัดเลือกทรานสฟอร์แมนท์บนอาหารเลี้ยงเชื้อ MacConkey agar base ที่มีไซโลสและยาปฏิชีวนะแอมพิซีลลิน พบ 1โคลน ที่มีความเสถียรให้ชื่อว่าโคลน 289 และรีคอมบิแนนต์พลาสมิดที่ได้ให้ชื่อว่า pUR289 เมื่อนำ E.coli HB101 ที่มีรีคอมบิแนนต์พลาสมิด PUR289หรือพลาสมิด pUC18 มาเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวสูตร LB ที่มีไซโลสเป็นองค์ประกอบ พบว่าแอคติวิตีจำเพราะของกลูโคสไอโซเมอเรสมีค่าเท่ากับ 27.9 และ 11.0 นาโนโมล/นาที/มก.ของโปรตีน ตามลำดับ เมื่อใช้IPTG เป็นตัวเหนี่ยวนำในการสร้างเอนไซม์โดย E.coli HB101 ที่มีรีคอมบิแนนต์พลาสมิด pUR289 พบว่า มีแอคติวีตีจำเพาะเท่ากับ 33.3นาโนโมล/นาที/มก.ของโปรตีน เมื่อทำการศึกษาขนาดของดีเอ็นเอที่ใส่เข้าไป(inserted DNA) ในรีคอมบิแนนต์พลาสมิด pUR289 วิเคราะห์โดยอะกาโรสเจลอิเล็กโทรโฟริซิสพบว่ามีขนาด 1.8 กิโลเบส จากการศึกษาแผนที่เรสทริกชัน(Restriction map) พบว่ามีตำแหน่งตัดจำเพาะของเรสทริกชันเอนไซม์BamHI HindIII และ PstI จากการทำโคลนย่อย พบว่าชิ้นส่วนHindIII-HindIII มีความจำเป็นต่อการแสดงออกของยีน(geneespression) ในขณะที่ชิ้นส่วน EcoRI-PStI ไม่มีความจำเป็นต่อการแสดงออกของยีนและดีเอ็นเอขนาดเล็กสุดที่สามารถแสดงออกได้มีขนาดประมาณ 1.4 กิโลเบส จากการทำ southern blot hybridization พบว่าชิ้นส่วนPstI-XbaI ของดีเอ็นเอที่ใส่เข้าไปสามารถไฮบริไดซ์กับโครโมโซมอลดีเอ็นเอของ Streptomyces sp.190-1 ที่ตัดด้วย BamHI |
| บรรณานุกรม | : |
รัชนี ไสยประจง . (2536). การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli.
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. รัชนี ไสยประจง . 2536. "การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli".
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย. รัชนี ไสยประจง . "การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli."
กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2536. Print. รัชนี ไสยประจง . การโคลนและการแสดงออกของยีนกลูโคสไอโซเมอเรสจากStreptomyces sp.190-1 ใน Escherichia coli. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2536.
|
