วิทยานิพนธ์ฉบับนี้มีจุดประสงค์เพื่อศึกษาบริเวณเร่งปฏิกิริยาที่ตำแหน่ง S(,1)-subsite ของเอนไซม์ปาเปนบริสุทธิ์ด้วยสับสเตรทสังเคราะห์ที่เป็น อนุพันธ์ของพารา-ไนโตรอะนิไลด์ โดยทำการแยกน้ำยางจากผลดิบมะละกอ สายพันธ์แขกดำ พร้อมทำการยับยั้งแอคติวิตีของเอนไซม์ด้วยสารละลาย 2,2-dipyridyl disulphide (2PDS) อิ่มตัว เมื่อทำการแยกเอนไซม์ปาเปน ให้บริสุทธิ์ด้วยเครื่อง Fast protein liquid chromatography (FPLC) โดยใช้คอลัมน์ HiLoad 26/10 SP-Sepharose HP และนำไปตรวจสอบความบริสุทธิ์ และหาขนาดมวลโมเลกุลด้วยเทคนิค SDS-PAGE พบว่าปาเปนบริสุทธิ์มีขนาดมวลโมเลกุล ประมาณ 29 กิโลดาลตัน จากนั้นทำการสังเคราะห์สับสเตรทที่เป็นอนุพันธ์ของพารา -ไนโตรอะนิไลด์ ได้แก่ ~iN~i-Ac-L-Phe-Gly-~ip~iNA, ~iN~i-Ac-L-Phe-Leu- ~ip~iNA, ~iN~i-Ac-L-Phe-Arg-~ip~iNA, ~iN~i-Ac-L-Phe-~ip~iNA และ ~iN~i-Ac-L-Phe-Glu-~ip~iNA จากการตรวจสอบความบริสุทธิ์ด้วย thin-layer chromatography, optical rotation, nuclear magnetic resonance, mass spectroscopy และ elemental analysis พบว่าสับสเตรทที่สังเคราะห์ขึ้นมีความ บริสุทธิ์สูง เมื่อเปรียบเทียบความจำเพาะบริเวณ S(,1)-subsite ของปาเปน บริสุทธิ์โดยวิธีทางจลศาสตร์ พบว่า k(,cat) / K(,m) ของ ~iN~i-Ac-L-Phe-Gly -~ip~iNA, ~iN~i-Ac-L-Phe-Leu-~ip~iNA, ~iN~i-Ac-L-Phe-Arg-~ip~iNA และ ~iN~i-Ac-L-Phe-Phe-~ip~iNA มีค่าเท่ากับ 269.77, 1367.00, 1469.37 และ 473.49 M(-1).S(-1) ตามลำดับ ส่วน ~iN~i-Ac-L-Phe-Glu-~ip~iNA ไม่สามารถ นำมาเปรียบเทียบได้ อย่างไรก็ตามเมื่อทำการตรวจสอบแอคติวิตีกับเอนไซม์ปาเปน บริสุทธิ์ที่ความเข้มข้นอิ่มตัว พบว่ามีแอคติวิตีเท่ากับ 0.05 dA(,410) / min แสดงให้เห็นว่าบริเวณ S(,1)-subsite ของ active site ของเอนไซม์ปาเปนบริสุทธิ์ มีคุณสมบัติค่อนข้าง broad specificity