Envelope protein (E) เป็นโปรตีนโครงสร้าง (structural protein) ของ ไวรัสเดงกี่ ซึ่งเป็นไวรัสสาเหตุของโรคไข้เลือดออก (dengue hemorrhagic fever) มีคุณสมบัติเป็นโปรตีนแอนติเจนที่สามารถกระตุ้นให้เกิดการสร้างแอนติบอดี้ในร่างกาย ของผู้ป่วยติดเชื้อไวรัสเดงกี่ ในการศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อทำการสกัดและ ศึกษาคุณสมบัติของ recombinant envelope protein ที่ผลิตได้จากระบบ Baculovirus Expression Insect Cell System เพื่อตรวจสอบความเหมาะสมของ recombinant envelope protein ในการนำไปใช้เป็นแอนติเจน เพื่อพัฒนาชุดตรวจ วินิจฉัยการติดเชื้อไวรัสเดงกี่ต่อไป การผลิต recombinant envelope protein ของไวรัสเดงกี่จากระบบ Baculovirus Expression Insect Cell System นั้น อาศัยเซลล์แมลงเป็นเซลล์เจ้าบ้านซึ่งเมื่อถูก infect ด้วย recombinant envelope baculovirus ซึ่งเป็นแบคคิวโลไวรัสที่ผ่าน กระบวนการทางพันธุวิศวกรรมให้มียีนควบคุมการสังเคราะห์ envelope protein เป็นส่วนหนึ่งของจีโนมของคิวโลไวรัส ทำให้เซลล์มีการผลิต recombinant envelope protein ซึ่งสามารถตรวจสอบการสังเคราะห์ recombinant envelope protein ได้โดยวิธี Western blot analysis โดยใช้ monoclonal antibody (3H5) ที่มี ความจำเพาะต่อ envelope protein ของไวรัสเดงกี่ ผลการตรวจสอบพบแถบโปรตีนขนาด ประมาณ 57.8 kDa ที่จำเพาะต่อแอนติบอดี้ และเมื่อเปรียบเทียบขนาดมวลโมเลกุลกับ recombinant envelope protein ที่ผลิตจากแบคทีเรีย (ขนาดประมาณ 55.3 kDa) พบว่ามีขนาดใหญ่กว่าเล็กน้อย คาดว่าน่าจะเป็นผลจากการที่ recombinant envelope protein ที่ผลิตจากเซลล์แมลงมีกระบวนการ post-translational modification โดยเฉพาะกระบวนการ glycosylation เกิดขึ้น จากการทดลองทำการสกัด recombinant envelope protein โดยใช้วิธี Cation Exchange Chromatography และวิธี Immobilized Metal ion Affinity Chromatography (IMAC) พบว่าในการสกัด recombinant envelope protein ด้วยวิธี Cation Exchange Chromatography นั้น recombinant envelope protein สามารถจับกับ cation exchanger ในสภาวะ native และถูกชะออกมาใน elute buffer ที่มี NaCl อย่างน้อย 0.25M ส่วนการสกัด recombinant envelope protein ด้วยวิธี IMAC นั้น recombinant envelope protein สามารถจับกับ Co(2-) metal ที่ immoblize บน resin ในสภาวะ denature และถูกชะออกมาใน elute buffer ที่มี 0.2 M imidazole โดยพบว่าการสกัดทั้งสองวิธีสามารถกำจัดโปรตีนปนเปื้อนได้เพียงบางส่วนเท่านั้น จากการตรวจสอบการ glycosylation ของ recombinant envelope protein โดยใช้ เอนไซม์ N-glycosidase F พบว่าน่าจะเป็นไกลโคโปรตีน การตรวจสอบความเสถียรของ recombinant envelope protein ที่อยู่ในรูปของ infected Sf-9 cells ซึ่งทำ การเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ -20(+,ฐ)C เป็นเวลา 0-6 เดือนนั้น พบว่าการเก็บรักษา infected Sf-9 cells ตั้งแต่ 2 เดือนขึ้นไปนั้น ความเสถียรของ recombinant envelope protein ลดลง และลดลงถึง 71% ในเดือนที่ 6 ส่วนในการตรวจสอบความจำเพาะ ระหว่าง recombinant envelope protein กับ monoclonal antibody ที่มีความจำเพาะ กับ epitope ต่างๆของ envelope protein ของไวรัสเดงกี่ พบว่า recombinant envelope protein ที่ผลิตจากเซลล์แมลงมีความเป็นแอนติเจนที่ดีกว่าเมื่อเปรียบเทียบ กับ recombinant envelope protein ที่ผลิตจากแบคทีเรีย แสดงว่า recombinant envelope protein ที่ผลิตจากเซลล์แมลงมีความคล้ายคลึงกับ dengue 2 envelope protein ในธรรมชาติมากกว่า recombinant envelope protein ที่ผลิตจากแบคทีเรีย นอกจากนี้ยังพบว่า recombinant envelope protein ที่ผลิตจากเซลล์แมลงมี ความจำเพาะกับซีรั่มของผู้ป่วยไข้เลือดออกและไม่มีปฏิกิริยาข้ามกับซีรั่มของคนปกติ เมื่อตรวจสอบโดยวิธี dot blot analysis ซึ่งแสดงให้เห็นถึงคุณภาพที่ดีของ recombinant envelope protein ในด้านความจำเพาะต่อแอนติบอดี้ในซีรั่มของผู้ป่วย ซึ่งมีความเหมาะสมในการนำไปพัฒนาชุดตรวจวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัสต่อไป