3-hydroxysteroid dehydrogenase deficiency (3HSD deficiency) เป็นสาเหตุที่พบไม่บ่อยของ congenital adrenal hyperplasia (CAH) เกิดจากการกลายพันธุ์แบบ inactivating mutation ของยีน HSD3B2 และหากไม่ได้ รับการวินิจฉัยที่ถูกต้อง อาจมีผลให้ผู้ป่วยเสียชีวิตได้ในช่วงวัยทารกตอนต้นจากภาวะ adrenal crisis ใน classic form ผู้ป่วยจะมีอาการและอาการแสดงของ salt-wasting crisis เมื่ออายุประมาณ 2-3 สัปดาห์ ผู้ป่วยทั้งเพศหญิง และชายอาจมีอวัยวะเพศกำกวมได้ การวินิจฉัยโรค 3HSD deficiency ค่อนข้างยาก เนื่องจาก peripheral 3HSD1 activity ทำให้การแปลผลการตรวจทางฮอร์โมนมีความซับซอ้ นมากขึ้น เชน่ ระดับ 17- hydroxyprogesterone (17OHP) ซึ่งตามหลักการไม่ควรจะสูงในผู้ป่วย แต่มีรายงานผู้ป่วยจำนวนหนึ่งที่พบระดับ 17OHP ใน serum มีค่าสูงมากจนใกล้เคียงกับผู้ป่วย classic 21-hydroxylase deficiency ซึ่งอธิบายจากต่อมหมวก ไตของผู้ป่วย 3HSD2 deficiency จะมีการคั่งของระดับสารตั้งต้น 5 steroids ซึ่งได้แก่ pregnenolone, 17- hydroxypregnenolone และ DHEA ในปริมาณสูง ซึ่ง 17-hydroxypregnenolone จะถูกเอนไซม์ 3HSD1 ในตับ เปลี่ยนเป็น 17OHP ได้ วัตถุประสงค์โครงการ เพื่อศึกษาการกลายพันธุ์ของยีน HSD3B2 ในผู้ป่วยซึ่งมีลักษณะทางคลินิกเข้าได้กับโรค 3HSD deficiency จำนวน 6 ราย รายที่ 1 เป็นเด็กหญิงทารกเชื้อชาติเอลซัลวาดอร์ซึ่งถูกส่งตัวมารับการตรวจ เพิ่มเติมเนื่องจากผล 17OHP newborn screening มีค่าสูงผิดปกติ ผลการตรวจยืนยัน 17OHP พบว่ามีค่าสูงมาก (8230 นาโนกรัม/ดล.) ผู้ป่วยถูกเรียกตัวกลับมาประเมินเมื่ออายุ 13 วัน ขณะนั้นผู้ป่วยมีอาการขาดน้ำ น้ำหนักตัว ลด มีอาเจียนและกินได้น้อย ค่าเกลือแร่ในเลือดพบโซเดียมต่ำและโพแทสเซียมสูง การตรวจร่างกายพบมี skin pigmentation และอวัยวะเพศภายนอกเป็นหญิงปกติ ประวัติครอบครัวเพิ่มเติมพบว่าผู้ป่วยมีพี่สาวซึ่งมีอาการของ salt-losing crisis ที่อายุ 28 วันและลูกพี่ลูกน้องของบิดา 2 รายทั้งเพศชายและเพศหญิงมีอวัยวะเพศกำกวมร่วมกับ salt-losing crisis ซึ่งทำให้สนับสนุนความเป็นไปได้ของ 3HSD deficiency ผู้ป่วยรายที่ 2 เป็นเด็กชายไทยอายุ 2 เดือน มีอาการซึมและอาเจียน ตรวจพบมีอวัยวะเพศกำกวม (micropenis, penoscrotal hypospadias) โครโมโซม เพศเป็น 46,XY ผลเกลือแร่มีลักษณะ salt-losing ผู้ป่วยรายที่ 3 เป็นเด็กชายอินเดีย มีอวัยวะเพศกำกวมและมี อาการของการสูญเสียเกลือตั้งแต่อายุ 4 วัน ผลการตรวจ ACTH stimulation พบมีการเพิ่มขึ้นของ 5/4 steroids ผลวิเคราะห์การกลายพันธุ์ของยีน HSD3B2 พบว่าผู้ป่วยรายที่ 1 มีการกลายพันธุ์ชนิด p.Q334X ซึ่งเปลี่ยนจาก glutamine เป็นรหัสหยุด (premature stop mutation) ซึ่งเป็นการกลายพันธุ์ที่ยังไม่เคยมีการรายงานมาก่อน (novel mutation) และพบว่าบิดาและมารดาเป็น heterozygous carrier ของ p.Q334X เนื่องจากการกลายพันธุ์ ดังกล่าวจะทำให้ C-terminal part ของ HSD3B2 protein ขาดหายไปซึ่งเป็นส่วนที่มีความสำคัญในการทำหน้าที่ ของเอนไซม์ 3HSD type 2 ซึ่งคาดว่าจะทำให้โปรตีนสูญเสียหน้าที่การทำงานอย่างสิ้นเชิง ผู้ป่วยรายที่ 2 พบมี การกลายพันธุ์ชนิด homozygous p.T259M ซึ่งมีการรายงานมาก่อนหน้านี้ และผู้ป่วยรายที่ 3 พบ homozygous p.Y180X ซึ่งเป็นการกลายพันธุ์ที่ยังไม่เคยมีการรายงานมาก่อน (novel mutation) เช่นกัน การศึกษานี้นอกจากจะ ทำให้เกิดความเข้าใจถึงผลของการกลายพันธุ์ต่อการทำงาน ซึ่งนำไปสู่การเกิดโรค ยังได้ย้ำถึงบทบาทที่สำคัญของ การทดสอบทางพันธุกรรมที่มีต่อการวินิจฉัยโรครวมทั้งการให้คำปรึกษาทางพันธุกรรมที่ถูกต้องเหมาะสม Background: 3β-hydroxysteroid dehydrogenase (3βHSD), type 2 (encoded by HSD3B2) is expressed in the adrenals and gonads. HSD3B2 mutations cause the rare form of congenital adrenal hyperplasia, “3βHSD deficiency.” In its classic form, affected individuals have salt wasting early in infancy and may have ambiguous genitalia in both sexes. The presence of peripheral type 1, 3βHSD often complicates the hormonal diagnosis of this disorder, in that very high 17α-hydroxypregnenolone levels can be converted extra-adrenally to 17-hydroxyprogesterone (17OHP). Objective: To describe patients with suspected 3β-hydroxysteroid dehydrogenase deficiency and perform mutation and functional analysis of the HSD3B2 gene. Patient and Methods: Patient 1: A 46,XX female newborn with no signs of virilization was referred for evaluation of positive 17OHP newborn screening, and later developed salt-wasting crisis at 13 days of age. The confirmatory test revealed highly elevated 17OHP suggested 21-hydroxylase deficiency, but sequencing of the CYP21 gene was not consistent. Further family history suggested 3HSD deficiency. Patient 2 and 3 are 46,XY male newborns with ambiguous genitalia (micropenis, penoscrotal hypospadias) who developed salt-losing since early infancy. The ACTH tests revealed elevated 5/4 steroids. Methods: ACTH stimulation tests were performed to evaluate steroid hormone profiles. With Institutional Review Board approval and informed consent, leukocyte genomic DNA was extracted and the entire coding regions of the HSD3B2 gene were assessed by polymerase chain reaction (PCR) and sequencing analysis. Results: Patient 1 was homozygous for the novel nonsense mutation Q334X in the HSD3B2 gene, inherited from both parents. Patient 2 was homozygous for T259M mutation. Patient 3 was homozygous for the novel nonsense mutation Y180X and his parents were heterozygous carrier. Conclusions: We report the novel mutations of HSD3B2 gene, Q334X and Y180X responsible for classic 3βHSD deficiency. The clinical and hormonal phenotypes can be complicated in this disorder, and supports the benefits of 17OHP newborn screening to detect various forms of congenital adrenal hyperplasia.