อุปกรณ์ตรวจวิเคราะห์ของไหลจุลภาคฐานกระดาษ (microfluidic paper-based analytical devices, μPADs) เป็นเทคโนโลยีทางเลือกหนึ่งของการสร้างอุปกรณ์ตรวจวินิจฉัยโรคทางคลินิก ที่ทำได้ง่าย ต้นทุนต่ำ พกพาได้ สามารถใช้แล้วทิ้ง สำหรับใช้ในประเทศกำลังพัฒนา ในงานวิจัยนี้ ได้พัฒนา μPADs สำหรับการตรวจวิเคราะห์สิ่งตัวอย่างจากเลือดครบส่วน โดยใช้วิธีจุ่มแว๊กซ์ ซึ่งเป็นวิธีใหม่ รายงานโดย คณะผู้วิจัย วัสดุที่ใช้ประกอบด้วยกระดาษกรอง Whatman No.1 และกระดาษสำหรับแยกเลือด ซึ่งทำให้ เชื่อมติดกันโดยการจุ่มกระดาษที่ประกบกับแม่แบบที่เป็นเหล็ก ลงไปในแว๊กซ์ที่กำลังหลอมเหลวด้วยความ ร้อน โดยแม่แบบที่เป็นเหล็กที่สั่งตัดให้มีรูปแบบและขนาดที่ต้องการด้วยการใช้เทคนิคเลเซอร์ ทำหน้าที่ ป้องกันไม่ให้แว๊กซ์ซึมเข้าสู่กระดาษ จึงเกิดเป็นบริเวณที่ชอบน้ำและไม่ชอบน้ำอยู่บนกระดาษ อุณหภูมิที่ เหมาะสมสำหรับการสร้าง μPADs คือ 120-130 องศาเซลเซียส ระยะเวลาที่เหมาะสมในการจุ่มแว๊กซ์คือ 1 วินาที ขนาดท่อบริเวณชอบน้ำที่เล็กที่สุดที่สามารถสร้างได้ 639 ± 7 ไมโครเมตร และมีความสามารถใน การให้ผลซ้ำ (reproducibility) โดยมีค่า RSDs เท่ากับ 1.48% และ 6.30% สำหรับการสร้างขอบเขต บริเวณชอบน้ำของ test zone และ sample zone ตามลำดับ กระดาษแยกเลือดที่เหมาะสมสำหรับสร้าง μPADs คือชนิด LF1 โดย LF1-μPADs สามารถใช้ แยกเลือดที่มีค่าฮีมาโทคริต (hematocrit) ความเข้มข้นระหว่าง 24-55% ได้ภายใน 2 นาที เมื่อใช้เลือด ปริมาตร 15-22 μL โดยไม่จำเป็นต้องเจือจางเลือดก่อน เมื่อได้ทดสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์ พบว่า พลาสมาที่แยกได้บน μPADs นี้ ไม่มีการปนเปื้อนของเม็ดเลือดแดงหรือการแตกของเม็ดเลือดแดง การ ตรวจวัดปฏิกิริยาการเกิดสีบน μPADs มีความแม่นยำสูง มีค่า within-day precision เท่ากับ 2.62% (n =10) และ between day precision เท่ากับ 5.84% (n =30) เมื่อนำ μPADs ไปประยุกต์ใช้ตรวจวัด ปริมาณโปรตีนในเลือด (n = 5) โดยใช้หลักการจับกับสี bromcresol green ผลการทดลองพบว่าผลตรวจ โดยใช้ LF1-μPADs ไม่มีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญกับวิธีที่ใช้ในห้องปฏิบัติการการแพทย์ทั่วไป (p > 0.05, pair t-test) โดยสรุป μPADs ที่นำเสนอในงานวิจัยนี้ มีศักยภาพนำไปใช้ตรวจวินิจฉัยทาง ห้องปฏิบัติการการแพทย์ โดยใช้สิ่งส่งตรวจที่เป็นเลือดครบส่วนได้ในขั้นตอนเดียว ทำให้ลดระยะเวลาการ เตรียมตัวอย่างและลดระยะเวลาตรวจวัด เป็นวิธีที่ทำได้ง่าย มีต้นทุนต่ำ จึงเหมาะสำหรับประเทศกำลัง พัฒนาเป็นอย่างยิ่ง Microfluidic paper-based analytical devices (μPADs) are an alternative technology for fabricating simple, low-cost, portable and disposable platforms for clinical diagnosis in developing countries. In this paper, wax dipping, a new method described by our group, was used for fabricating the μPAD for blood separation. The final device was composed of a blood separation membrane combined with patterned Whatman No.1 paper. The designed pattern was transferred onto paper by dipping an assembly iron mold into melted wax. The optimal melting temperature was in the range of 120-130 °C, and the optimal dipping time was 1 second. The smallest hydrophilic channel that could be created by the wax dipping method was 639 ± 7 μm in size. The reproducibility of the μPAD fabrication for hydrophilic channel width of the test zone and sample zone was 1.48% and 6.30%, respectively. The LF1-μPAD was shown to be functional with human whole blood of 24-55% hematocrit without dilution, and effectively separated blood cells from plasma within 2 minutes when blood volumes 15-22 μL were added to the device. Microscopy was used to confirm that the device isolated plasma with high purity and showed no blood cells or cell hemolysis at the detection zone of the μPAD. The colorimetric measurement reproducibility on the μPAD was 2.62 % (n =10) and 5.84% (n =30) for within-day and between day precision, respectively. The efficiency of blood separation on μPAD was studied by plasma protein detection using the bromocresol green (BCG) colorimetric assay. The results revealed that protein detection on the μPAD was not significantly different from the conventional method (p > 0.05, pair t-test). Our proposed blood separation on μPAD has the potential for reducing turnaround time, sample volume, sample preparation and detection processes for clinical diagnosis and point-of care testing, especially in developing countries.